[發明專利]一種檢測己烯雌酚的電化學免疫傳感器的制備方法及應用

無效

• 申請號: 201310696498.5
• 申請日: 2013-12-18
• 公開（公告）號: CN103698383A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發明（設計）人: 黃加棟;李杰;劉素
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N27/48
• 分類號: G01N27/48;G01N33/53
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測己烯雌酚的電化學免疫傳感器，其特征在于，包括以下步驟：

(1)?碳納米管-離子液體-殼聚糖納米復合物(MWCNTs-IL-CS)和金納米粒子的制備：

50?mg的殼聚糖溶于?20?ml的1%的乙酸中，得到殼聚糖溶于，一定量的碳納米管和粒子通過超聲溶于得到的殼聚糖溶液中，得到MWCNTs-IL-CS；取1?ml，1%的HAuCl₄·4H₂O溶于99?ml水中，加入一定量的檸檬酸鈉溶液，100℃回流1?h，得到AuNPs納米粒子；

(2)?抗體復合物的制備：

10?mg?DA和1?mg?GO?溶于?10?ml?pH為8.5的PBS中，超聲2?min，形成均勻的分散溶；60℃攪拌24?h，得到PRGO，重新溶于10?ml水中；500?μl?HAuCl₄·4H₂O?(10?mg/mL)加如上述得到的溶液中，攪拌2?h后，再加入一定量的檸檬酸鈉溶液，攪拌2?h，離心清洗，再溶于10?ml水中；最后，100?μl，1?mg/mL的HRP?和100?μl，5?μg/mL的Ab加入到2?ml上述溶液中，4℃攪拌一夜，用PBS緩沖液離心清洗，溶于2?ml含有1%BSA的PBS中備用；

(3)?檢測己烯雌酚免疫傳感器的制備：

滴加10μl的MWCNTs-IL-Cs在處理好的金電極表面，室溫下干燥；再滴加20μl的AuNPs在修飾的電極表面，室溫下干燥；再滴加一定量的己烯雌酚完全抗原DES-BSA在修飾電極表面，室溫下干燥，每一步修飾后用PBS緩沖溶液曲線電極。

2.如權利要求1所述的制備的一種檢測己烯雌酚的電化學免疫傳感器，用于檢測己烯雌酚的步驟如下：(1)以Ag/AgCl電極為參比電極，鉑絲電極為對電極，在修飾電極表面同時滴加己烯雌酚標準品和抗體復合物并作為工作電極，連接電化學工作站，在含有H₂O₂和HQ的PBS底液中，通過循環伏安法檢測，掃描電壓是0.6—-0.6?V，檢測添加H₂O₂前后電化學信號的變化和己烯雌酚標準品濃度之間的關系，繪制工作曲線；

(2)?將待測物代替己烯雌酚標準品，按照工作曲線的方法進行檢測。