[發明專利]一種重組蚓激酶的制備方法及重組蚓激酶在審
| 申請號： | 201310696443.4 | 申請日： | 2013-12-18 |
| 公開（公告）號： | CN104726437A | 公開（公告）日： | 2015-06-24 |
| 發明（設計）人： | 張耀洲;楊曉麗;畢臻樂;王小飛;舒特俊;陳劍清 | 申請（專利權）人： | 天津耀宇生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/68 | 分類號： | C12N9/68 |
| 代理公司： | 北京匯澤知識產權代理有限公司 11228 | 代理人： | 張秋越 |
| 地址： | 300457 天津市濱海新區經濟技術開發區*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 重組 激酶 制備 方法 | ||
1.一種重組蚓激酶的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
1）將蚓激酶基因與載體連接，構成重組表達載體；
2）將步驟1）得到的重組表達載體轉化大腸桿菌感受態細胞，得到重組桿狀病毒質粒；
3）將重組桿狀病毒質粒轉染家蠶細胞，獲得含有蚓激酶基因的重組病毒；
4）將所述重組病毒接種家蠶，勻漿后純化獲得重組蚓激酶。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟1)?蚓激酶基因的制備方法為：以赤子愛勝蚓為材料，提取總RNA，逆轉錄獲得cDNA，并進行RT-PCR擴增蚓激酶基因，引物如下：上游引物：5′-CGCGGATCCATGGAACTTCCTCCCGG，下游引物：5′-GGCCTCGAGTTAGTTGTTGGTGAT。
3.根據權利要1所述的制備方法，其特征在于，步驟1）所述載體為pFastBac，步驟2）所述大腸桿菌感受態細胞為DH?10Bac大腸桿菌感受態細胞。
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟1）所述載體為pFastBac?HTA。
5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟3）將重組桿狀病毒質粒以脂質體介導法轉染家蠶細胞，得到重組桿狀病毒質粒。
6.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟3）所述家蠶細胞為家蠶BmN細胞。
7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟4）所述家蠶為家蠶成蟲、家蠶幼蟲或家蠶蛹。
8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，步驟4）將所述重組病毒針刺接種家蠶蛹，反應5-7天后，獲得表達蚓激酶的工程蠶蛹，工程蠶蛹勻漿、離心和純化后獲得重組蚓激酶。
9.權利要求1~8任一項制備的重組蚓激酶，其序列為SEQ?ID?NO.2所示。
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