[發(fā)明專利]巖藻聚糖硫酸酯及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310695032.3
• 申請日: 2013-12-17
• 公開（公告）號: CN104710539A
• 公開（公告）日: 2015-06-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王宇;陳艷萍;譚道鵬;馮貽東;嚴(yán)啟新;馮漢林
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳海王藥業(yè)有限公司
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61P7/02
• 代理公司: 北京律誠同業(yè)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11006
• 代理人: 黃韌敏

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種巖藻聚糖硫酸酯的制備方法以及由該方法所獲得的產(chǎn)物。

技術(shù)背景

巖藻聚糖硫酸酯（Fucoidan）是一類主要由巖藻糖及硫酸酯基團(tuán)組成的多糖類物質(zhì)，廣泛存在于多種褐藻及一些海洋無脊椎動物（如海參、海膽等）中。1913年，Kylin從褐藻掌狀海帶（Laminaria?digitata）中首次提取得到巖藻聚糖硫酸酯。大量研究證實巖藻聚糖硫酸酯具有抗凝血、降血脂、抗氧化、抗腫瘤、增強(qiáng)機(jī)體免疫機(jī)能等多種生物學(xué)活性。

盡管關(guān)于巖藻聚糖硫酸酯的結(jié)構(gòu)研究較多，由于其結(jié)構(gòu)缺乏規(guī)律且常常帶有分支結(jié)構(gòu)，絕大多數(shù)巖藻聚糖硫酸酯的精細(xì)結(jié)構(gòu)仍未被闡明。巖藻聚糖硫酸酯的結(jié)構(gòu)存在明顯的種間差異，某些種類褐藻如墨角藻（Fucus?vesiculosus）及海洋無脊椎動物，其含有的巖藻聚糖硫酸酯結(jié)構(gòu)較為簡單，基本上只包含巖藻糖及硫酸根。但是絕大多數(shù)的巖藻聚糖硫酸酯結(jié)構(gòu)復(fù)雜，還可能包含其他中性單糖如甘露糖、半乳糖、葡萄糖、木糖等，有些還含有糖醛酸及乙酰基團(tuán)。

海洋無脊椎動物來源結(jié)構(gòu)較為簡單，主要是由L-巖藻糖所構(gòu)成的直鏈多糖，從一種美國肉參中分離得到巖藻聚糖硫酸酯，經(jīng)解析推測其結(jié)構(gòu)為[→3Fuc(2S,4S)α1→3Fuc(2S)α1→3Fuc(2S)α1→3Fucα1→]n的重復(fù)單元構(gòu)成。

目前，對于來源于動物的巖藻聚糖硫酸酯類多糖的研究較少，常采用的提取方法主要是蛋白酶水解法。蛋白酶水解法是提取動物多糖比較理想的方法，它在不改變多糖鏈結(jié)構(gòu)的前提下，以蛋白酶水解，對于多糖的釋放十分有效。為了使蛋白質(zhì)充分水解，所用蛋白水解酶多采用兩種以上酶制劑來加強(qiáng)水解效果。但酶解法提取多糖耗時長，且所得到的多糖中蛋白殘留量較多。

提取的動物多糖常為混合物，如海參多糖則主要包括海參硫酸軟骨素和巖藻聚糖硫酸酯，需對其進(jìn)行分離純化。目前，常用的分離純化方法有乙醇分級、鹽分級、離子交換色譜法及凝膠過濾色譜法等。乙醇分級分離及鹽分級分離可將巖藻聚糖硫酸酯與其他多糖粗略分開，其成本低廉，易于操作，但得到的產(chǎn)物純度較低。離子交換色譜法及凝膠過濾色譜法，純化效果好，獲得巖藻聚糖硫酸酯純度高，但是樹脂價格昂貴，操作繁瑣，處理規(guī)模小。

天然巖藻聚糖硫酸酯因其分子量較大，不易被人體吸收利用，因此，大多將其降解為低聚巖藻聚糖硫酸酯，其具有粘度低、易吸收、生物利用率高等優(yōu)點，表現(xiàn)出更好的生物活性。常用的降解多糖方法包括物理法、化學(xué)法和酶解法。物理降解法，如超聲波法、輻射降解法，該類方法節(jié)省能源和時間、簡化操作程序、減少有機(jī)溶劑使用、提高反應(yīng)速率和顯著降低化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的廢棄物對環(huán)境造成的危害等優(yōu)點，但是突出的缺點是收率太低，生產(chǎn)成本過高，不易實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。酶解法，反應(yīng)條件溫和，能耗低，而且酶催化具有高效性和專一性，能選擇性地切斷糖苷鍵。酶降解多糖成本高，尚無專一性的降解酶，且篩選酶的過程也是個比較復(fù)雜的問題。化學(xué)降解法，如氧化降解法，傳統(tǒng)的過氧化氫降解法過氧化氫用量大，增加了降解產(chǎn)物分離純化的難度，反應(yīng)所需降解溫度比較高，容易引起產(chǎn)品變色，影響產(chǎn)品外觀。

現(xiàn)有針對巖藻聚糖硫酸酯提取、分離純化、降解技術(shù)均存在不足，這在一定程度上制約了巖藻聚糖硫酸酯的研究與利用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個目的是提供一種巖藻聚糖硫酸酯的制備方法，包括以下步驟：

（1）以干燥棘皮動物為原料，以堿解、酶解提取獲上清液；

（2）調(diào)節(jié)上清液pH值沉淀蛋白質(zhì)，離心、鹽析、醇沉獲得粗多糖；

（3）經(jīng)乙醇分級沉淀、超濾，獲得巖藻聚糖硫酸酯；

（4）采用元素周期表第四周期過渡金屬離子形成的催化劑催化的過氧化物降解或經(jīng)酸降解獲得低聚巖藻聚糖硫酸酯；

其中，所述低聚巖藻聚糖硫酸酯的重均分子量為8-140kDa，其結(jié)構(gòu)特征為至少包括質(zhì)量百分比為40%-60%的巖藻糖的20%-40%的硫酸酯基。