[發明專利]利用蔗渣纖維素發酵生產L-乳酸的方法

在審

• 申請號: 201310691303.8
• 申請日: 2013-12-12
• 公開（公告）號: CN103627739A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: 孫衛東;唐艷瓊;戴莉;唐湘毅;蘇芬芬
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12P7/56
• 分類號: C12P7/56;C12R1/845
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務所有限責任公司 45104
• 代理人: 楊立華

1.一種利用蔗渣纖維素發酵生產L-乳酸的方法，其特征在于以蔗渣為原料，通過原料預處理、纖維素酶解，以霉菌為發酵菌種，以蔗渣纖維素的酶解液為碳源，游離細胞發酵或固定化細胞發酵生產L-乳酸。

2.根據權利要求1所述的利用蔗渣纖維素發酵生產L-乳酸的方法，其特征在于原料預處理按以下操作進行：用粉碎機粉碎蔗渣，過20-40目篩；精確稱取過篩后的蔗渣30g，按料液比為1:30加入質量濃度為0.6-0.8%的H₂O₂和3-5%的NaOH混合溶液，于85℃下攪拌3-5h；抽濾，用蒸餾水洗滌至濾液為中性，殘渣于105℃干燥箱中干燥至恒重，再用粉碎機粉碎，過20-40目篩，收集備用。

3.根據權利要求2所述的利用蔗渣纖維素發酵生產L-乳酸的方法，其特征在于纖維素酶解按以下操作進行：精確稱取預處理后的蔗渣，按每g蔗渣加入濃度為10mg/mL的纖維素酶液4-8mL，底物濃度28-66g/L，pH4.0-5.4的檸檬酸緩沖溶液17-21mL，于45-55℃、轉速120r/min的恒溫水浴鍋中酶解36-60h，然后煮沸滅酶活，離心分離，回收酶解液備用。

4.根據權利要求3所述的利用蔗渣纖維素發酵生產L-乳酸的方法，其特征在于采用游離細胞發酵方式，按以下操作進行：

<1>斜面培養：將菌種米根霉（Gim3.129）接入滅菌的試管PDA培養基中，于28℃培養4-6天，后于4℃冰箱中保存；

<2>孢子懸浮液：取一支已培養好的斜面菌種，用無菌生理鹽水將斜面上的孢子洗下，于滅菌的三角瓶中，加入無菌的玻璃珠充分打散，用滅菌的脫脂棉過濾，用無菌水沖洗濾渣，使濾液體積為30mL，稀釋至孢子懸浮液含1×10⁷個孢子/mL；

<3>種子培養：將孢子懸浮液按4%的接種量接入到裝液量為20-70mL的三角瓶中，于28-32℃、200r/min下培養12-24h，制成種子培養液；

<4>發酵培養：將種子培養液按10-14%的接種量接入到裝液量為50mL的三角瓶中，30℃、180-200r/min下，發酵36-72h，得到含發酵產物L-乳酸的發酵液。

5.根據權利要求4所述的利用蔗渣纖維素發酵生產L-乳酸的方法，其特征在于：

所述斜面培養基按以下配制：馬鈴薯200g，加水1000mL，葡萄糖15-25g，瓊脂15-25g，加熱溶解分裝試管，121℃滅菌20min；

所述種子培養基按以下配制：葡萄糖為50-70g/L，酵母膏5-7g/L，KH₂PO₄0.3-0.5g/L，MgSO₄.7H₂O0.2-0.4g/L，ZnSO₄.7H₂O0.08g/L，CaCO₃10g/L，121℃滅菌20min，CaCO₃分開滅菌；

所述發酵培養基按以下配制：酶解液30-38g/L，（NH₄）₂SO₄3-7g/L，KH₂PO₄0.2-0.4g/L，MgSO₄.7H₂O0.2-0.4g/L，ZnSO₄.7H₂O0.04-0.08g/L，CaCO₃10-30g/L，121℃滅菌20min，CaCO₃分開滅菌。