[發明專利]一種新型雙水相高速逆流色譜

無效

• 申請號: 201310690915.5
• 申請日: 2013-12-13
• 公開（公告）號: CN104707358A
• 公開（公告）日: 2015-06-17
• 發明（設計）人: 肖紅斌;劉丹;鄒曉偉;高明哲
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: B01D15/08
• 分類號: B01D15/08
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 劉陽

技術領域

本發明為一種新型雙水相高速逆流色譜，將親水性醇或酮、無機鹽和水組成的雙水相溶劑體系的一相作為固定相，另一相作為流動相，通過J-型螺旋管高速逆流色譜儀實現強極性化合物的分離。

背景技術

眾所周知，水煎湯劑是中藥臨床應用最廣泛的劑型之一，其藥效物質的主體必定由大量強極性組分構成，事實也證明了強極性化合物對人體的健康發揮著重要的作用。然而，中藥物質基礎研究更多的關注弱極性和中等極性化合物，對強極性化合物較少涉足。對這些強極性組分的物質基礎及藥理藥效的研究將會開辟一片新的中藥研究領域，其中物質基礎研究又是后續研究的必要保證。但強極性中藥組分的分離一直是中藥物質基礎研究的難點，這主要是因為強極性中藥藥效物質從前期的萃取富集到單體化合物的分離制備存在諸多問題，首先，大多數中藥材的傳統前處理過程為有機溶劑萃取，以達到藥效物質初步富集的目的，但有機溶劑極性有限，致使大量的強極性化合物在萃取步驟中已部分或完全損失；再者，強極性化合物的分子結構中大多含有羧基、磺酸基、氨基、糖基等極性基團，這些基團的存在大大增加了化合物的親水性和不穩定性使其在常規的反相色譜柱上保留很弱，甚至沒有保留。目前的色譜分離方法還不能實現強極性化合物的良好分離。

高速逆流色譜（High-speed?countercurrent?chromatography，HSCCC）是一種成功的液/液分配色譜，廣泛應用于中藥藥效物質的分離制備。但一直以來，受到有機/水兩相溶劑體系極性的限制，高速逆流色譜更多的適用于非極性和中等極性化合物的分離，即使是極性最強的正丁醇-乙酸-水體系仍然不能滿足大多數強極性中藥藥效物質的分離需要。為滿足強極性中藥藥效物質分離純化的需要，目前國內外，除研制新型逆流色譜儀外，研究最為活躍的有兩個方向，一是在傳統有機/水兩相溶劑體系基礎上發展新的洗脫方法，如正相和反相洗脫、雙轉向洗脫、梯度洗脫（pH梯度、極性梯度）等，在一定程度上解決了強極性中藥藥效物質的分離問題。二是新型溶劑體系的提出，包括pH區帶體系（pH-Zone?system）、離子對體系（Ion?pair?system）、雙水相體系（Aqueous?two-phase?system）、三相體系（Three?phase?system）、液/液/固三相體系（Liquid/liquid/solid?three-phase?system）和離子液體體系（Ionic?liquid?system）等親水溶劑體系以適用于強極性中藥藥效物質的分離。但目前發展的新型溶劑體系大多數都需要在特制的逆流色譜儀中運行，尚無法實現普及應用。

1990年，Greve和Kula首次報道了由親水性醇、水和無機鹽組成的新型雙水相體系，該體系與傳統的雙水相體系相比，具有極性更強，黏度更低、且廉價、環保等優點。盡管新型雙水相溶劑體系在國內外的研究才剛剛起步，但在強極性中藥藥效物質和化工產品的萃取富集及蛋白質、多糖等雜質的除去方面已表現出廣闊的研究價值和應用空間。如譚天偉院士在國內首先報道了應用乙醇/磷酸鹽體系萃取甘草中的甘草酸鉀（biotechnology?Letter24(2002)1417-1420）；修志龍教授將該體系成功應用于發酵液中1，3-丙二醇等化工產品的萃取分離（Separation?and?Purification?Technology66(2009)472-478）。然而面對組成復雜的中藥提取物，僅利用單級，甚至多級萃取均無法實現目標化合物的單體制備，將新型雙水相體系應用于目前廣泛應用的高速逆流色譜技術中有望解決這一難題。

發明內容

本發明的目的在于突破有機/水兩相溶劑體系高速逆流色譜技術分離強極性中藥藥效物質時，溶劑體系極性低，分離度差、回收率低、保留時間長等制備問題，提供一種采用新型雙水相溶劑體系的高速逆流色譜新方法。

本發明的技術方案：

一種新型雙水相高速逆流色譜：是將醇水雙相新型雙水相溶劑體系的一相作為固定相，另一相作為流動相應用于高速逆流色譜，所述的新型雙水相溶劑體系由中等極性有機溶劑、親水性醇或酮、無機鹽和水組成。

所述的高速逆流色譜儀為J-型半制備高速逆流色譜儀，配備三個串聯的螺旋管柱，柱體積210mL，螺旋管自轉半徑和公轉半徑之比（β值）0.5-0.8。

所述新型雙水相溶劑體系中的中等極性有機溶劑為正丁醇，親水性醇或酮為乙醇，無機鹽為飽和硫酸銨和水組成，它們的體積比在（0-10）：（1-10）：10：10（V：V）的范圍內配制。

所述新型雙水相體系配置溫度和分配系數測定溫度一致，為30-40℃。