[發明專利]一種抗腫瘤淋巴細胞的鑒定方法

有效

• 申請號: 201310690699.4
• 申請日: 2013-12-16
• 公開（公告）號: CN103823068A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發明（設計）人: 周菊華
• 申請（專利權）人: 周菊華
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及醫學領域，尤其涉及的是一種抗腫瘤淋巴細胞的鑒定方法。?

背景技術

環境污染和遺傳因素會導致DNA和基因的突變，癌細胞起源于人體內細胞由于DNA突變和損傷的無控制生長。通常，癌細胞生長形成腫瘤，癌細胞還會轉移到別處繼續生長，從而破壞正常的組織器官，導致病人的死亡。?

癌癥已成為常見病、多發病。據2008年的統計數據，全球有新發癌癥病例1266萬，死亡800萬，估計至2015年新發癌癥病例將達到1500萬之多。《2012中國腫瘤登記年報》對外發布，報道全國每6分鐘就有一人被確診為癌癥，每天有8550人成為癌癥患者，每七到八人中就有一人死于癌癥。全國癌癥發病形勢嚴峻，發病率與死亡率呈持續上升趨勢，每年新發癌癥病例約350萬，因癌癥死亡約250萬。伴隨著對空氣中彌漫的PM2.5的不安，這一連串灰色的數字令中國人對癌癥的認知繃得更緊了。?

目前癌癥是繼心血管之后的第二位導致人類死亡的因素，大約一半的男人和三分之一多的女人會產生癌癥。我國居民一生罹患癌癥的概率為22％，癌癥已成為人類第一殺手。目前，還沒有很有效的辦法來對付癌癥，特別是晚期癌癥病人的治療。20世紀以來，以手術治療、放射治療和化學治療三大常規武器為治療和康復做出巨大的貢獻，但這些傳統治療手段均有其局限性，在癌癥治療中未能取得整體滿意效果。比如手術治療，只適合大約20％的較早期的癌患者，有一部分手術治療可以獲得滿意的根治效果，遺憾的是這樣的情況實在是少數，大部分病例不適合手術治療。化療是雙刃劍，全身化療，毒副作用大，少數病種可以獲得根治效果，但大部分化療只是姑息或輔助效果，盲目化療?無益生活質量提高，甚至因為化療導致并發癥而增加身體和經濟負擔。為了根治癌癥，迫切需要找到一種有效的治療癌癥的辦法。?

腫瘤的免疫治療是一種新興的、具有顯著療效的腫瘤治療模式，是一種自身免疫抗癌的新型生物技術治療方法。它是運用生物技術和生物制劑對從病人體內采集的免疫細胞進行體外培養和擴增后回輸到病人體內的方法，來激發，增強機體自身免疫功能，從而達到治療腫瘤的目的。腫瘤的免疫治療是繼手術、放療和化療之后的第四大腫瘤治療技術。?

利用特異的殺傷性淋巴細胞進行腫瘤免疫治療起源于八十年代，利用抗腫瘤的淋巴細胞進行腫瘤免疫治療是一種特異、有效而先進的癌癥治療手段。近年來，這一技術在皮膚癌晚期病人的治療上得到成功的應用。臨床試驗證明，四分之三的皮膚癌晚期病人經過治療后癌癥腫塊明顯消退，一半的皮膚癌晚期病人完全康復。因此，利用抗腫瘤的淋巴細胞進行腫瘤細胞免疫治療是一種非常有效的癌癥治療新技術，有著廣闊的應用前景。?

利用特異的殺傷性淋巴細胞進行腫瘤免疫治療的過程包括腫瘤組織樣品的取得，從腫瘤樣品中分離腫瘤殺傷性淋巴細胞，腫瘤殺傷性淋巴細胞的大量擴增和活化，腫瘤殺傷性淋巴細胞輸入癌癥病人和臨床效果的觀察。腫瘤殺傷性淋巴細胞的分離是關鍵。對從皮膚癌癥病人分離腫瘤殺傷性淋巴細胞已進行了大量的研究，并取得了很好的效果，可以從百分之八十以上的皮膚癌癥病人分離得到腫瘤殺傷性淋巴細胞。研究顯示，也可以從其他癌癥病人患者分離得到腫瘤殺傷性淋巴細胞。因此，腫瘤殺傷性淋巴細胞的腫瘤免疫治療也可以應用于其他癌癥病人。?

腫瘤免疫治療的關鍵是從癌癥病人體內分離、鑒定腫瘤殺傷性淋巴細胞。通常，從癌癥病人中切除一小塊腫瘤組織，經過7-10天的刺激和培養，得到幾百萬的腫瘤浸潤性淋巴細胞。然后，進行腫瘤浸潤性淋巴細胞和腫瘤細胞的共培養。二十四小時后，利用酶聯免疫測定法檢測淋巴細胞是否釋放γ干擾素，從而確定淋巴細胞是否具有腫瘤殺傷性。這種經典的鑒定腫瘤殺傷性淋巴細胞的方法，耗時較長，而且需要腫瘤細胞作為靶細胞。往往從癌癥病人腫瘤組織中誘導培養原代腫瘤細胞，非常困難。所以，迫切需?要簡易快速的方法來鑒定來自癌癥病人的腫瘤殺傷性淋巴細胞，以便有效地用于腫瘤的免疫治療。?

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對現有技術的不足，提供了一種抗腫瘤淋巴細胞的鑒定方法。?

本發明的技術方案如下：?

一種抗腫瘤淋巴細胞的鑒定方法，包括以下步驟：?

(1)取0.5厘米大小的癌癥病人的腫瘤組織塊，在生物安全柜中用手術刀將其切成1毫米見方的腫瘤組織小塊；?

(2)將腫瘤組織放于24孔培養板，添加RPMI-1640培養基和白細胞介素-2，然后將24孔培養板置于37℃和5％CO2培養箱中培養；?