[發明專利]GⅠ型諾如病毒的環介導等溫擴增檢測引物組、檢測方法和試劑盒

有效

• 申請號: 201310690315.9
• 申請日: 2013-12-16
• 公開（公告）號: CN103642943A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發明（設計）人: 寇曉霞;吳清平;薛亮;張菊梅
• 申請（專利權）人: 廣東省微生物研究所;廣東環凱微生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

1.一種應用環介導等溫擴增檢測GⅠ型諾如病毒的檢測引物組，其特征在于，由下列引物組成：

上游外引物F3：5’-AGCATGGGACTCAACACA-3’；

下游外引物B3：5’-ATGGGAATCCAGATGGCA-3’；

上游內引物FIP：5’-CAATTCTGGTGAGGCCGTAAG-TAGACAAATTATGACAGAATCCTTC-3’；

下游內引物BIP：5’-CGAGGTTGTGGCCCAAGATT-CCTCTTTGACCCTGATGAC-3’。

2.一種非疾病的診斷和治療目的的GⅠ型諾如病毒的檢測方法，其特征在于，對樣品進行病毒RNA提取，再反轉錄成cDNA，然后通過環介導等溫擴增的方法用權利要求1所述的檢測引物組對cDNA進行選擇性擴增，確認是否存在有擴增產物。

3.根據權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，所述的樣品為醫院的腹瀉樣品，水或食品。

4.根據權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，所述的通過環介導等溫擴增的方法用權利要求1所述的檢測引物組對cDNA進行選擇性擴增具體為：環介導等溫擴增體系為：體系總體積20-100μL，包括10×Thermopol反應緩沖液、10mmol/LdNTPs、10μmol/L上游外引物F3、10μmol/L下游外引物B3、40μmol/L上游內引物FIP、40μmol/L下游內引物BIP、100mmol/L?MgSO4、2mol/L甜菜堿、1-5μL8U/μL?Bst?DNA聚合酶和1-5μL?c?DNA，加滅菌雙蒸水ddH2O至反應總體積，反應條件為在溫度為63℃孵育40-70min。

5.根據權利要求2、3或4所述的檢測方法，其特征在于，所述的確認是否存在有擴增產物是在終止反應的反應管中加入1μL10%SYBR?GreenⅠ顯色劑，10min后觀察結果，如果顏色為黃色，則樣品GⅠ型諾如病毒陰性，無GⅠ型諾如病毒，如果顏色為綠色，則樣品GⅠ型諾如病毒陽性，含有GⅠ型諾如病毒。

6.一種GⅠ型諾如病毒的檢測試劑盒，包括RNA提取試劑，RNA反轉錄試劑，環介導等溫擴增試劑和檢測引物組，其特征在于，所述的檢測引物組由下列引物組成：

上游外引物F3：5’-AGCATGGGACTCAACACA-3’；

下游外引物B3：5’-ATGGGAATCCAGATGGCA-3’；

上游內引物FIP：5’-CAATTCTGGTGAGGCCGTAAG-TAGACAAATTATGACAGAATCCTTC-3’；

下游內引物BIP：5’-CGAGGTTGTGGCCCAAGATT-CCTCTTTGACCCTGATGAC-3’。