[發(fā)明專利]一種高純度阿維菌素的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310689642.2
• 申請(qǐng)日: 2013-12-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103641873A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊德昌;劉書(shū)琴;高玉成;張賓;張麗強(qiáng);楊飛;李學(xué)紅;王棟良
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華北制藥集團(tuán)愛(ài)諾有限公司
• 主分類號(hào): C07H17/08
• 分類號(hào): C07H17/08;C07H1/06
• 代理公司: 石家莊國(guó)域?qū)＠虡?biāo)事務(wù)所有限公司 13112
• 代理人: 蘇艷肅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于工業(yè)微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及到一種利用阿維菌素粗品制備出組分比例可控的高純度阿維菌素的方法。?

背景技術(shù)

阿維菌素(Avermectins，AVM)，又稱阿佛曼菌素，是由阿維菌素鏈霉菌（Streptomyces?avermitilis）發(fā)酵產(chǎn)生的一組大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，是C5，C22-C23和C25三個(gè)位置上結(jié)構(gòu)不同的8種同系物，即4個(gè)主要組分（Ala、A2a、B1a?和B2a）和4?個(gè)次要組分（A1b、A2b、B1b及B2b），具體結(jié)構(gòu)如下：?

，其中：。

阿維菌素是一類具有殺蟲(chóng)、殺螨、殺線蟲(chóng)活性的十六元環(huán)結(jié)構(gòu)的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，對(duì)體內(nèi)、外寄生蟲(chóng)具有極強(qiáng)的殺傷活性，無(wú)抗真菌和細(xì)菌活性，也不能抑制蛋白質(zhì)甲殼素的合成，但它有很強(qiáng)的驅(qū)蟲(chóng)和殺蟲(chóng)活性，廣泛用于治療多種家畜體內(nèi)、外寄生蟲(chóng)病。阿維菌素作用機(jī)制較為特殊，不易使害蟲(chóng)產(chǎn)生抗性，主要通過(guò)作用于昆蟲(chóng)外周神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的γ-氨基丁酸(GABA)?受體和谷氨酸門控的氯離子通道致使昆蟲(chóng)麻痹、死亡，由于哺乳動(dòng)物以γ-氨基丁酸介導(dǎo)的神經(jīng)位于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，阿維菌素不容易通過(guò)血腦屏障進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，故而具有高選擇性和高安全性，在常用劑量下，對(duì)人、畜安全，不傷害天敵，不破壞生態(tài)。阿維菌素因具有結(jié)構(gòu)新穎、高效、廣譜、低殘留和對(duì)人畜及環(huán)境安全等這些優(yōu)點(diǎn)，而成為一種重要的綠色生態(tài)型抗生素。?

21?世紀(jì)作為一個(gè)環(huán)保生態(tài)世紀(jì)，健康、清潔、綠色、環(huán)保的生活越來(lái)越成為人們的選擇和追求，這給綠色生態(tài)型阿維菌素的發(fā)展帶來(lái)空前的機(jī)遇。同時(shí)阿維菌素既可作為農(nóng)用抗生素類殺蟲(chóng)劑，又可用于獸用驅(qū)蟲(chóng)劑，還可作為家庭衛(wèi)生用藥，同時(shí)也是驅(qū)除絲蟲(chóng)的人用驅(qū)蟲(chóng)劑，作為原料可用于人類醫(yī)藥、農(nóng)藥、獸藥，?被稱為“三位一體”的藥物，正因其廣闊的應(yīng)用領(lǐng)域從而為阿維菌素及衍生產(chǎn)品帶來(lái)良好的市場(chǎng)前景。?

阿維菌素的分離純化是進(jìn)一步深入研究其結(jié)構(gòu)改性及產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用的前提，阿維菌素的8個(gè)成分中B1a組分毒性最低、生物活性最強(qiáng)，批量生產(chǎn)過(guò)程不易將B1a和B1b兩者分離，目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于阿維菌素B1a分離純化的文獻(xiàn)報(bào)道也較少。英國(guó)專利GB2185480A提供了一種阿維菌素的制備方法，將菌絲體用乙醇、甲醇或丙酮的水溶液提取濃縮后離心，沉淀用非水溶劑如氯仿或二氯甲烷溶解后過(guò)濾，提取物用XAD大孔樹(shù)脂、硅膠柱進(jìn)行分離，得到阿維菌素；中國(guó)專利申請(qǐng)（申請(qǐng)?zhí)?3115294.1）發(fā)酵液通過(guò)色譜分離樹(shù)脂HP-20SS(Diaion)、凝膠色譜柱Sephadex?LH-20、HPLC反相等方法分離得到阿維菌素。這些方法都步驟繁瑣，批處理量小，而且無(wú)法實(shí)現(xiàn)對(duì)B1a和B1b的比例控制。?

國(guó)內(nèi)對(duì)阿維菌素的純化方法研究主要集中在結(jié)晶純化條件的優(yōu)化上，結(jié)晶純化方法不僅需要反復(fù)進(jìn)行重結(jié)晶，操作步驟繁瑣，并且結(jié)晶過(guò)程中的溫度、攪拌、晶種等多種因素都會(huì)對(duì)最終得到的產(chǎn)品純度造成影響，最終得到的產(chǎn)品中阿維菌素B1的純度也不能保證在一個(gè)較高的水平（謝智等，Avermectin冷卻結(jié)晶工藝的研究，中國(guó)抗生素雜質(zhì)，2005年1月第30卷第1期，P58-61）。蔣琳等在2002年（蔣琳，硅膠柱層析分離制備阿維菌素B_2的效果，上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),?2002,?18(1)?:?81-?83）采用層析法分離制備阿維菌素，以V(石油醚):V(異丙醇)=7:1的混合溶液為洗脫液，以硅膠柱為固定相對(duì)阿維菌素B1具有良好的分離性能，但是這種方法成本很高，不適合工業(yè)化生產(chǎn)，并且這種方法還存在溶劑系統(tǒng)易揮發(fā)、不利于溶劑的回收及循環(huán)利用的缺點(diǎn)，從而造成成本增高，且會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染，不適合現(xiàn)代環(huán)保型綠色生產(chǎn)理念。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種工藝簡(jiǎn)單，收率穩(wěn)定，可規(guī)模化生產(chǎn)組分比例可控的高純度阿維菌素B1的制備工藝，以解決現(xiàn)有的分離純化方法所存在的步驟繁瑣、批處理量小，以及成本高昂、污染環(huán)境的問(wèn)題。

本發(fā)明的目的是按如下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：?

一種高純度阿維菌素的制備方法，該方法是將阿維菌素粗粉用丙酮溶解，加樣至裝有十八烷基硅烷鍵合硅膠反相色譜填料的色譜柱，使用極性溶劑與水的混合液作為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，分步收集，液相檢測(cè)，合并、濃縮、干燥，得到目的產(chǎn)品，所述目的產(chǎn)品中阿維菌素B1純度98.5~99.5%，并且97%≥阿維菌素B1a純度≥95%。

本發(fā)明所述的高純度阿維菌素的制備方法，所得目的產(chǎn)品中0＜雜質(zhì)含量≤0.1%。?

本發(fā)明所述的高純度阿維菌素的制備方法，所述的極性溶劑為甲醇、乙醇和乙腈中的任意一種。?