[發(fā)明專利]鏈球菌AUH-JLD109及其在柚皮素生物合成中的應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310689588.1
• 申請日: 2013-12-17
• 公開（公告）號: CN103740610A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發(fā)明（設計）人: 王秀伶;陳靜;邵子強;李佳宜
• 申請（專利權）人: 河北農業(yè)大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P17/06;C12R1/465
• 代理公司: 石家莊國為知識產權事務所 13120
• 代理人: 陸林生

1.一種鏈球菌（Streptococcus?sp.）AUH-JLD109，保藏號為CGMCC?No.8033。

2.如權利要求1所述的鏈球菌AUH-JLD109在柚皮素生物合成中的應用。

3.根據權利要求2所述的鏈球菌AUH-JLD109在柚皮素生物合成中的應用，其特征在于包括如下步驟：

（1）混菌種子液的培養(yǎng)

將鏈球菌（Streptococcus?sp.）AUH-JLD109的種子液與大腸埃希氏菌(Escherichia?coli)?AUH-D2-1的種子液接種于LB液體培養(yǎng)基或混菌發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到混菌種子液；所述大腸埃希氏菌(Escherichia?coli)?AUH-D2-1，保藏號為CGMCC?No.8031；

（2）底物柚皮苷與混菌種子液共培養(yǎng)

將步驟（1）得到的混菌種子液轉接到LB培養(yǎng)基或混菌發(fā)酵培養(yǎng)基中，加入柚皮苷粗品母液進行共培養(yǎng)；

（3）代謝產物的分離純化；

所述混菌發(fā)酵培養(yǎng)基的重量組成為：1.0-1.5%可溶性淀粉，1.0-2.0%蛋白胨，磷酸鹽0.3-0.7%和0.002%-0.008%的硫酸鐵，余量為水；磷酸鹽為磷酸氫二鉀和磷酸二氫鉀的混合物，磷酸氫二鉀與磷酸二氫鉀的質量比為2:1。

4.根據權利要求3所述的鏈球菌AUH-JLD109在柚皮素生物合成中的應用，其特征在于所述步驟（1）中鏈球菌AUH-JLD109的種子液通過下述方法培養(yǎng)：將低溫冷凍保存的鏈球菌AUH-JLD109融化并按15-20%接種量接種到盛有新鮮BHI液體培養(yǎng)基的試管中，37℃恒溫培養(yǎng)箱內培養(yǎng)24小時；再以10%接種量將試管中的菌株AUH-JLD109重新轉接到新鮮BHI液體培養(yǎng)基中，繼續(xù)培養(yǎng)18-24小時作為種子液。

5.根據權利要求3所述的鏈球菌AUH-JLD109在柚皮素生物合成中的應用，其特征在于所述步驟（1）中大腸埃希氏菌AUH-D2-1的種子液通過下述方法培養(yǎng)：將低溫冷凍保存的大腸埃希氏菌AUH-D2-1融化并按10-15%接種量接種到盛有新鮮LB液體培養(yǎng)基的試管中，?37℃恒溫培養(yǎng)箱內培養(yǎng)下培養(yǎng)24小時，再以10%接種量將試管中菌株AUH-D2-1重新轉接到新鮮LB液體培養(yǎng)基中，繼續(xù)18-24小時作為種子液。

6.根據權利要求3所述的鏈球菌AUH-JLD109在柚皮素生物合成中的應用，其特征在于所述步驟（1）中將鏈球菌（Streptococcus?sp.）AUH-JLD109的種子液與大腸埃希氏菌(Escherichia?coli)?AUH-D2-1的種子液各以10%的接種量接種于LB液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18-24小時。

7.根據權利要求3所述的鏈球菌AUH-JLD109在柚皮素生物合成中的應用，其特征在于所述步驟（2）混菌種子液按10-15%接種，加入柚皮苷粗品母液使柚皮苷的終濃度為5.5-6.5毫摩爾/升，37℃恒溫培養(yǎng)箱內培養(yǎng)2-3天。

8.根據權利要求3所述的鏈球菌AUH-JLD109在柚皮素生物合成中的應用，其特征在于所述步驟（2）中柚皮苷粗品母液中底物柚皮苷濃度為110-160毫摩爾/升。

9.根據權利要求3所述的鏈球菌AUH-JLD109在柚皮素生物合成中的應用，其特征在于所述步驟（2）中采用混菌發(fā)酵培養(yǎng)基進行共培養(yǎng)。

10.根據權利要求3所述的鏈球菌AUH-JLD109在柚皮素生物合成中的應用，其特征在于所述步驟（3）中分離純化為：等體積的乙酸乙酯將培養(yǎng)物萃取2次，萃取液過濾后蒸干，加入100%甲醇溶液，用制備柱在HPLC上進行分離，得到代謝產物柚皮素。