[發明專利]一種煙草提取物中煙堿含量的測定方法

有效

• 申請號: 201310688738.7
• 申請日: 2013-12-17
• 公開（公告）號: CN103822979A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發明（設計）人: 王凱;朱瑞芝;李智宇;冒德壽;劉強
• 申請（專利權）人: 紅塔煙草（集團）有限責任公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 昆明今威專利商標代理有限公司 53115
• 代理人: 賽曉剛

技術領域

本發明涉及一種煙草提取物中煙堿含量的測定方法，具體涉及利用高效液相色譜-光電二極管陣列檢測器法測定煙草提取物中煙堿的含量。?

背景技術

煙草提取物具有煙草本香，常用作煙草制品香原料，其香韻能夠與煙香協調并使煙香濃郁，在卷煙調香中的應用非常廣泛。煙草是一種復雜體系，從中鑒定出的化學成分多達數千種。煙草提取物由于其提取工藝不同，產品化學成分有所差異，而在煙草提取物中最重要也最引人關注的成分是煙堿(NICOTINE)。煙堿是煙草中最重要的生理活性物質，煙葉中煙堿含量高則勁頭大，刺激性增強，產生辛辣味，含量低則勁頭小，吸食淡而無味。因此煙草提取物中煙堿含量的高低，對其添加量有重要影響，是衡量煙草提取物品質、規格的重要參數，是控制煙草提取物的主要指標，對煙草提取物的應用有重要的指導意義。?

煙堿的結構式如下，由一個吡啶環和一個氫化吡咯環構成，其中含有一個不對稱碳原子，屬弱二級堿，最多可以捕獲兩個質子。因此煙堿一股以游離態、單質子態和雙質子態3種形態存在，其存在形態主要由體系pH決定。?

由于提取工藝的差別，不同溶劑對不同工藝的煙草提取物的適用性有明顯差異，導致煙草提取物中煙堿的提取分離較為困難。目前煙氣、煙葉中煙堿的分析方法主要是采用氣相色譜法，尚未有關于煙草提取物中煙堿含量的測定方法。因此，有必要探索一種快速、準確的煙草提取物中煙堿含量的測定方法，對煙草提取物的質量控制、應用研究具有指導意義。?

發明內容

本發明目的在于針對現有技術中所存在的不足之處，提供一種煙草提取物中煙堿含量的測定方法，該方法利用高效液相色譜-光電二極管陣列檢測器法來測定煙草提取物中的煙堿含量，能夠完全萃取煙草提取物中的煙堿，并通過選擇合適的流動相的pH抑制其他形態煙堿的生成，得到較好的色譜峰形，實現煙堿的檢出。?

本發明的目的是通過以下技術方案來實現的：煙草提取物中煙堿含量的測定方法包括以下操作步驟：?

①樣品萃取：將煙草提取物樣品以乙醇-水溶液超聲萃取，水脂兩用濾膜過濾，制得試樣；?

②測定：采用UPLC-PDA進行分析，儀器條件如下：?

高效液相色譜參考條件為，色譜柱：C18柱或等效柱；流速：0.2～0.4mL/min；柱溫：25～35℃；進樣量：2～10μL；流動相A為甲醇，流動相B為0.1％的磷酸氫二鉀溶液；?

步驟①中的乙醇-水溶液質量比例為95％～50％，煙草提取物樣品與溶液的固液比g/mL為1∶50～100。?

所述步驟①中超聲萃取功率為60KW，萃取時間為30min。?

所述步驟②中所用分析儀器為光電二極管陣列檢測器，其參考檢測波長為259nm。?

所述步驟②中所用流動相B為pH為8.5～9.0的磷酸鹽緩沖溶液。?

所述C18柱是：1.7μm，2.1mm×50mm。?

本發明的突出優點在于：能夠有效萃取煙草提取物中的煙堿，并且實現煙堿含量的測定，方法快速、準確，靈敏度高，重現性好。?

附圖說明

本發明以下將結合實施例作進一步描述，但并不限制本發明。?

圖1為本發明標準品色譜圖。?

圖2為本發明實際樣品高效液相色譜圖。?

具體實施方式

本發明煙草提取物中煙堿含量的測定方法包括以下操作步驟：?

①、樣品萃取：將煙草提取物樣品以乙醇-水溶液超聲萃取，水脂兩用濾膜過濾，制得試樣；?

②、測定：采用UPLC-PDA進行分析，儀器條件如下：?

高效液相色譜參考條件為，色譜柱：C18柱或等效柱；流速：0.2～0.4mL/min；柱溫：25～35℃；進樣量：2～10μL；流動相A為甲醇，流動相B為0.1％的磷酸氫二鉀溶液；?

步驟①中的乙醇-水溶液質量比例為95％～50％，煙草樣品與溶液的固液比g/mL為1∶50～?100。?

所述步驟①中超聲萃取功率為60KW，萃取時間為30min。?

所述步驟②中所用分析儀器為光電二極管陣列檢測器，其參考檢測波長為259nm。?

步驟②中所用流動相B為pH為8.5～9.0的磷酸鹽緩沖溶液。?

C18柱是：1.7μm，2.1mm×50mm。?

梯度洗脫條件見表1。?

表1快速型高效液相色譜梯度洗脫條件?

實施例1?