[發明專利]一種金黃色葡萄球菌肺炎模型的建立方法

有效

• 申請號: 201310686476.0
• 申請日: 2013-12-09
• 公開（公告）號: CN103735335B
• 公開（公告）日: 2016-10-12
• 發明（設計）人: 王逸麟;曾浩;鄒全明;章金勇;敬海明;董衍東;解慶華
• 申請（專利權）人: 成都歐林生物科技股份有限公司;中國人民解放軍第三軍醫大學
• 主分類號: A61D7/00
• 分類號: A61D7/00;A01K67/027
• 代理公司: 北京邦信陽專利商標代理有限公司 11012
• 代理人: 黃澤雄;陳悅軍

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種動物模型的建立，更具體地，涉及一種金黃色葡萄球菌肺炎動物模型的構建方法。

背景技術

金黃色葡萄球菌(Staphylococcus?aureus，SA)，以下簡稱金葡菌，有“嗜肉菌”的別稱。作為革蘭氏陽性菌的代表，它是引起醫院感染和社區感染的一種重要致病菌。感染以急性、化膿性炎癥為特征，局部感染可引起皮膚和軟組織等的化膿性感染，經久不愈；全身感染可導致骨髓炎、膿毒性關節炎、心內膜炎、肺炎、膿毒血癥等嚴重感染及并發癥，死亡率高達20％。同時，金葡菌的外毒素還可引起食物中毒、燙傷樣皮膚綜合征和中毒性休克綜合征等全身致死性感染。因此，加強對金葡菌感染的免疫防治研究，研制安全、有效的新型金葡菌基因工程疫苗將對有效控制金葡菌耐藥性蔓延和臨床金葡菌廣泛感染具有重要的戰略及現實意義。

在疫苗的研發過程中，需要利用合適的動物模型模擬人體致病環境，以研究金黃色葡萄球菌的致病機理、發病過程，通過藥理藥效實驗闡釋治療性藥物或疫苗的作用機理，從而研究新的防治金黃色葡萄球菌感染的藥物。因此，要求動物模型必須能夠很好地模擬病例。近年來，國內外研究者對動物肺炎模型展開了大量的實驗，分別用恒河猴、兔、小鼠、豬、大鼠等建立模型。猴類的生理結構特征與人類非常接近，作為實驗動物最為理想。但由于數量少，價格貴，其應用受到限制。目前國內外多采用嚙齒動物作為肺炎模型動物。

目前已有關于小鼠肺炎模型的報道，如王星等（王星等，中國抗生素雜志，2011，8（36）8，617-620）將50μL菌液直接滴入BALB/C左側鼻腔；又如呂小艷等（呂小艷等，山東醫藥，2010，50（3），10-12）將6-8周齡的昆明小鼠稱重后以10%水合氯醛腹腔麻醉后，仰臥位固定于實驗臺上，顯露聲門，用自制鈍頭注射器吸取菌液后插入氣管上段，將菌懸液注入氣管。以上方法均可以構建肺炎模型。但是這些方法依然存在很大的問題，主要體現在以下方面：1、由于鼻腔與口腔連通的結構，老鼠未麻醉直接滴入的菌液容易進入口腔而不能準確控制菌液進入肺臟，即無法準確控制感染的劑量，導致模型構建不穩定；2、插入氣管的方法雖然可以保證感染劑量，但作為一種有創的方法，在操作過程中容易造成動物器官損傷甚至導致實驗動物死亡；3、鼠種的選擇太多，缺乏一個明確的易感模型；4、細菌感染定植不穩定，容易造成模型的不穩定，而感染劑量的穩定與否與造模的成功率息息相關。

發明內容

本發明的目的是提供一種金黃色葡萄球菌感染肺炎動物模型的建立方法，以增加菌液感染的準確性，提高感染效率，增強肺炎模型的穩定性。

本發明的金黃色葡萄球菌肺炎模型的建立方法包括步驟：（1）麻醉小鼠；（2）對小鼠進行滴鼻處理。

優選地，步驟（1）中，使用異氟烷麻醉小鼠；優選用氧氣為輸送載體以4%～6%濃度（優選5%的濃度）的異氟烷進行吸入誘導麻醉，待小鼠進入外科深麻醉期后，以2%～4%的濃度（優選3%的濃度）維持麻醉。

優選地，步驟（2）包括以下內容：a、滴鼻過程中小鼠頭部仰臥幅度不能超過鼻咽部的生理弧度；b、順鼻腔外側壁滴藥，盡可能減少滴鼻過程中氣泡的產生；c、小鼠吸氣開始的瞬間滴加5μL以下量；d、細菌密度為2×10¹⁰～2×10¹¹CFU/ml；e、滴鼻細菌的總劑量為5×10⁹～1×10¹⁰CFU，優選為1×10¹⁰CFU；優選滴鼻總量為50～70μL，分兩次滴鼻的方式進行，每次滴鼻量為25～35μL，中間間歇30min。

優選地，使用小鼠肺組織培養和病理切片兩種方式進行感染效果的評價，同時以正常小鼠為對照。

優選地，所述小鼠是C57BL/6J小鼠；更優選地，所述小鼠是SPF級8周齡C57BL/6J小鼠。

以本發明的方法進行感染條件容易控制，感染率高，感染穩定，可引起小鼠顯著的肺炎癥狀。

附圖說明

圖1、金黃色葡萄球菌感染劑量的初步摸索生存率圖；

圖2、肺炎模型感染劑量的確定結果圖；

圖3、C57BL/6J小鼠經MRSA252感染后雙肺定值計數結果圖；

圖4、實驗組肺組織切片圖（100X，A為對照組，B為實驗組）。

具體實施方式

以下將通過具體實施例說明本發明內容，但本發明內容不限于以下實施例。