[發(fā)明專利]一種基于復(fù)合量子點(diǎn)的電化學(xué)DNA傳感器的制備方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310683245.4 | 申請日： | 2013-12-10 |
| 公開（公告）號： | CN103760201A | 公開（公告）日： | 2014-04-30 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 許世超;張晨;倪柳松;何磊;孫孟娜 | 申請（專利權(quán)）人： | 天津工業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | G01N27/26 | 分類號： | G01N27/26;G01N27/48 |
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| 地址： | 300160*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 基于 復(fù)合 量子 電化學(xué) dna 傳感器 制備 方法 | ||
1.一種基于復(fù)合量子點(diǎn)的電化學(xué)DNA傳感器，其特征在于：獲得高靈敏度的CdTe／Co量子點(diǎn)電化學(xué)DNA傳感器；這種電化學(xué)DNA傳感器以裸金電極為基底電極，依次組裝CdTe／Co復(fù)合量子點(diǎn)層，金納米粒子和探針單鏈DNA層。
2.權(quán)利要求1所述的傳感器，單鏈DNA為識別元件，CdTe／Co復(fù)合量子點(diǎn)和金納米粒子主要作用是固定探針DNA，并且能夠增加檢測信號。
3.權(quán)利要求1所述的一種基于復(fù)合量子點(diǎn)的電化學(xué)DNA傳感器的制備方法包括：
(1)CdTe／Co復(fù)合量子點(diǎn)的制備：稱取1-50mg的Te粉，10-100mg的NaBH4于比色管中，加1-5ml蒸餾水，在無氧條件下，冰浴或常溫制備NaHTe前驅(qū)體；稱取10-100mg?CdCl2以及1-50mg?CoCl2于三口燒瓶中，加入50-300ml蒸餾水和10-100μl巰基丙酸，并用0.1-1mol／L的NaOH調(diào)pH值為3-13，通入N2攪拌5-60分鐘脫氧；然后迅速加入之前制備的NaHTe前驅(qū)體，絕氧條件下攪拌后，在50-100℃中加熱回流得到CdTe／Co量子點(diǎn)；
(2)CdTe／Co量子點(diǎn)電化學(xué)DNA傳感器的制備：首先將DNA溶解到適量的Tris-HCl緩沖液中，然后用微量進(jìn)樣器取一定量的探針DNA滴加到電極表面，于0-10℃恒溫下密封靜置1-24小時，再依次用pH在8.0至9.0的Tris緩沖液和二次水沖洗電極表面以除去未組裝的探針DNA，進(jìn)而完成DNA傳感器的制備；
(3)CdTe／Co復(fù)合量子點(diǎn)電化學(xué)DNA傳感器與雙鏈DNA的雜交：將單鏈DNA／CdTe／Co／Au電極置于一定濃度的KCl溶液中浸泡一段時間，使MB從電極上解離下來，用二次水沖洗后，將單鏈／CdTe／Co／Au電極置于1—100mL一定濃度互補(bǔ)單鏈DNA雜交液中，10-60℃恒溫反應(yīng)1-10h后取出，依次用Tris緩沖液，二次水沖洗金電極表面除去未雜交的目標(biāo)DNA，即完成了DNA分子在電極表面的雜交，從而得到雙鏈DNA修飾金電極雙鏈DNA／CdTe／Co／Au；
(4)傳感器的電化學(xué)信號檢測：采用循環(huán)伏安法和差分脈沖伏安法進(jìn)行檢測，以不同修飾的金電極作為工作電極，鉑片電極為對電極，飽和甘汞電極為參比電極，亞甲基藍(lán)為指示劑，應(yīng)用電化學(xué)工作站測試不同修飾電極的循環(huán)伏安曲線、差分脈沖伏安曲線；檢測底液如無特別說明均為PBS緩沖液；用一定掃描電位和掃描速度進(jìn)行掃描，觀察峰型變化，記錄氧化峰電流值。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，在步驟(1)制備CdTe／Co復(fù)合量子點(diǎn)合成過程中控制Cd2+：Co2+摩爾比為1：1-100：1。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于各種DNA序列的溶液濃度為10μmol／L，TE緩沖液的體積由下列方程進(jìn)行計(jì)算：
體積=DNA合成報(bào)告單上的nmol數(shù)／10。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，在步驟(1)之后，(2)之前還應(yīng)對金電極表面進(jìn)行預(yù)處理，以去除金電極表面的雜質(zhì)并進(jìn)行CdTe／Co量子點(diǎn)的組裝：先將金電極用所配好的洗液中浸泡10-100min，然后用拋光粉拋光，再超聲清洗，最后拿出后用高純N2吹干；處理干凈的金電極在0.1-1mol／L硫酸溶液中通過電化學(xué)工作站其進(jìn)行循環(huán)伏安檢測，符合要求后，在二次水中浸泡備用；將上述金電極，于室溫下密封浸泡在1-100mL巰基乙胺溶液中1-10小時，再放入1-100mlCdTe／Co復(fù)合量子點(diǎn)溶液中密封浸泡1-10小時；最后將電極取出用二次水沖洗并用電化學(xué)工作站檢測。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，在步驟(2)中，用0.1-1001μl探針DNA滴加到電極表面，進(jìn)行DNA傳感器的制備。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，在步驟(3)中，KCl溶液為0.1-2mol／L，浸泡時間為1-120min。
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，在步驟(4)中，采用循環(huán)伏安法和差分脈沖伏安法進(jìn)行檢測，底液均為0.01-0.5mol／L的PBS緩沖液，pH在6.0至9.0之間；掃描電位-0.2～1.4V，掃描速度為10-100mV／s。
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