[發明專利]一種檢測自噬信號通路的試劑、PCR檢測方法及其應用

無效

• 申請號: 201310682812.4
• 申請日: 2013-12-13
• 公開（公告）號: CN103642927A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發明（設計）人: 梁曄;隋愛華;劉世海;姚如永;徐文華;劉相萍;周泉
• 申請（專利權）人: 青島大學醫學院附屬醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 青島聯智專利商標事務所有限公司 37101
• 代理人: 王曉曉

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，尤其涉及一種檢測自噬信號通路的試劑、PCR檢測方法及其在肺癌細胞中的應用。

背景技術

細胞死亡分為程序性細胞死亡和壞死。程序性細胞死亡又分為2種：I型為細胞凋亡，Ⅱ型為自噬性細胞死亡。自噬是胞漿大分子物質和細胞器在膜包囊泡中降解的生物學過程，具有多種生理功能。自噬主要包括兩方面：首先抑制自噬,腫瘤細胞壞死,導致局部炎癥反應加劇,從而刺激腫瘤生長;另外一方面應激的細胞產生無效自噬,可加劇基因組不穩定性,導致癌基因激活和腫瘤的發生。

在某些情況下，自噬可以導致細胞死亡，即自噬性細胞死亡，許多抗腫瘤藥物都能夠誘導腫瘤細胞發生自噬。有研究表明,通過小干擾RNA來抑制自噬相關基因,能加速細胞死亡,表明自噬是腫瘤對抗細胞毒藥物的一種反應。因此,抑制自噬也可以作為一種治療腫瘤的手段。然而在某些腫瘤藥物作用下,自噬通過抑制凋亡途徑而保護腫瘤細胞;自噬也可以清除損傷的蛋白質和細胞器從而起到保護腫瘤細胞的作用,即所謂的“保護性自噬”。該類自噬保護了腫瘤細胞，有利于腫瘤細胞度過惡劣的外環境，從而促使腫瘤細胞的存活和生長。

自噬與腫瘤的關系是近年的研究熱點。在肺癌傳統的抗腫瘤藥物作用下,自噬與自噬性死亡及其調節機制還有許多不明之處。隨著自噬研究的深入有可能為肺癌及其他惡性腫瘤的治療提供新的途徑。

發明內容

本發明針對現有技術中如何確定自噬核心信號分子的調控，如何解釋核心分子在腫瘤細胞中的變化的困難，提供了一種檢測細胞生長、自噬的信號通路的試劑和PCR檢測方法，本發明將涉及細胞自噬的信號分子集中在一個平板上，通過做一次實時熒光定量PCR反應，反應細胞的生存狀態，探討在肺癌細胞系中引起自噬信號通路變化的可能靶分子與靶途徑，為研究核心自噬信號蛋白的調節提供最直接的證據。

為實現上述發明目的，本發明采用下述技術方案予以實現：

一種檢測細胞自噬信號通路的試劑，它包括以下引物：

（1）檢測AKT1基因的PCR反應引物，其引物序列如下：

5'-CACAAACGAGGGGAGTACAT-3'；

5'-GCCATCATTCTTGAGGAGGAAG-3'；

（2）檢測AMBRA1基因的PCR反應引物，其引物序列如下：

5'-TGGGGAGGTTAGGATTTGGG-3'；

5'-GAGCCGTAGGGTGGAAAG-3'；

（3）檢測APP基因的的PCR反應引物，其引物序列如下：

5'-GCCCTGCGGAATTGACAA-3'；

5'-CCATCTGCATAGTCTGTGTCT-3'；

（4）檢測ATG10基因的的PCR反應引物，其引物序列如下：

5'-ATAAGATGCGACTGCTACAGG-3'；

5'-CAATGCTCAGCCATGATGTGA-3'；

（5）檢測ATG12基因的的PCR反應引物，其引物序列如下：

5'-TAGAGCGAACACGAACCATC-3'；

5'-CACTGCCAAAACACTCATAGAG-3'；

（6）檢測ATG16L1基因的的PCR反應引物，其引物序列如下：

5'-TCTGGGACATTCGATCAGAGA-3'；

5'-CCTTTCTGGGTTTAAGTCCAG-3'；

（7）檢測ATG16L2基因的PCR反應引物，其引物序列如下：

5'-ACCTGCGTGTCAGCAACA-3'；

5'-CAGCTTTGGTCCAGTCAGAA-3'；

（8）檢測ATG3基因的PCR反應引物，其引物序列如下：

5'-GATGGCGGATGGGTAGATAC-3'；

5'-TCTTCACATAGTGCTGAGCAAT-3'；

（9）檢測ATG4A基因的PCR反應引物，其引物序列如下：

5'-CAGCGAATGAACATCCTAAACC-3'；

5'-CAGTGGTTGTCACTTCTGG-3'；

（10）檢測ATG4B基因的PCR反應引物，其引物序列如下：

5'-AGTTGGCGAAGGCAAGTC-3'；

5'-CCACGTATCGAAGACAGCAA-3'；

（11）檢測ATG4C基因的PCR反應引物，其引物序列如下：