[發明專利]一種艾滋病（HIV-1）高精確核酸定量檢測的方法及其試劑盒

有效

• 申請號: 201310681720.4
• 申請日: 2013-12-12
• 公開（公告）號: CN103667534A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 李望豐;蔡一榮;關爾鑫;趙世源;王丹;肖樊;周凱;任旭
• 申請（專利權）人: 東北制藥集團遼寧生物醫藥有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 沈陽維特專利商標事務所(普通合伙) 21229
• 代理人: 甄玉荃

1.一種艾滋病（HIV-1）高精確核酸定量檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒的基因擴增位點位于HIV基因組的5’LTR保守區域。

2.一種艾滋病（HIV-1）高精確核酸定量檢測試劑盒，其特征在于：試劑盒包括磁珠法核酸提取試劑盒和HIV核酸擴增試劑盒，其中磁珠法核酸提取試劑盒包括裂解結合液、漂洗液A、漂洗液B、漂洗液C、洗脫液、磁珠液；HIV核酸擴增試劑盒包括RT-PCR反應液、酶混合液、HIV-內標、HIV定量參考品1-4、陰性質控品、臨界陽性質控品、強陽性質控品。

3.如權利要求2所述的一種艾滋病（HIV-1）高精確核酸定量檢測試劑盒，其特征在于：所述磁珠法核酸提取試劑盒中裂解結合液組成為含有十二烷基硫酸鈉0.5-2.5%，Triton?X-1000.5-2.0ml/100ml，異硫氰酸胍2-6.0mol/L，1-10mM/L?EDTA（PH7.5）；所述磁珠法核酸提取試劑盒中漂洗液A組成為含有Triton?X-1000.5-2.0ml/100ml，氯化鋰0.5-1mol/L；所述磁珠法核酸提取試劑盒中漂洗液B組成為含有Triton?X-1000.5-2.0ml/100ml，氯化鉀0.1-0.3mol/L，60-80%乙醇；所述磁珠法核酸提取試劑盒中漂洗液C組成為含有Triton?X-1000.5-2.0ml/100ml，氯化鈉0.1-0.3mol/L，60-80%乙醇；所述磁珠法核酸提取試劑盒中洗脫液組成為含有10mmol/L?Tris.HCl（PH8.3），0.01-0.05%Prolin300；所述磁珠法核酸提取試劑盒中磁珠液組成為直徑為1μm的氧化硅超順納米磁珠，濃度為10-40mg/ml。

4.如權利要求2所述的一種艾滋病（HIV-1）高精確核酸定量檢測試劑盒，其特征在于：所述HIV核酸擴增試劑盒中RT-PCR反應液包括用于檢測靶基因和內標的探針、用于擴增靶基因和內標的上游引物以及下游引物、RT-PCR緩沖液；HIV核酸擴增試劑盒中用于檢測靶基因的探針序列為：5'-ATCTGAGCCTGGGAGCTCTCTGGCTAGCT-'3（SEQ?ID?NO:1），5'端標記為FAM熒光發生基團，3'端標記為BHQ1熒光淬滅基團；用于內標檢測的探針序列為：5'-CAGACTCCACATCGACCCTACCCGACTGC-'3（SEQ?ID?NO:2），5'端標記為HEX熒光發生基團，3'端標記為BHQ1熒光淬滅基團；用于擴增靶基因的上游引物序列為：5'-CCTGTACTGGGTCTCTCTGGTTAG-'3（SEQ?ID?NO:3）；用于擴增靶基因的下游引物序列為：5'-TCACACAACAGACGGGCACACAC-'3（SEQ?ID?NO:4）；用于擴增內標的上游引物序列為：5'-TTCGATCTCCGTCGAACCTTG-'3（SEQ?ID?NO:5）；用于擴增內標的下游引物序列為：5'-TTCTCAGGACTCCAGTCGCTG-'3（SEQ?ID?NO:6）。

5.如權利要求2或4所述的一種艾滋病（HIV-1）高精確核酸定量檢測試劑盒，其特征在于：所述HIV核酸擴增試劑盒中用于檢測靶基因的探針使用濃度為5-20pmol，優選靶基因探針使用濃度為8pmol；用于檢測內標的探針使用濃度為5-20pmol，優選內標探針使用濃度為8pmol；用于檢測靶基因的上下游引物使用濃度為10-30pmol，優選靶基因上下游引物使用濃度為20pmol；用于檢測內標的上下游引物使用濃度為5-20pmol，優選內標上下游引物使用濃度為8pmol。

6.如權利要求2所述的一種艾滋病（HIV-1）高精確核酸定量檢測試劑盒，其特征在于：所述HIV核酸擴增試劑盒中RT-PCR緩沖液組成為50mmol/LTris-HCl（PH8.3），10mmol/L(NH4)₂SO₄，75mmol/LKCl，2.5mmol/LMgSO₄，0.15mmol/L?dNTPs。