[發(fā)明專利]一種蜜環(huán)菌濃縮液的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310680901.5
• 申請日: 2013-12-12
• 公開（公告）號: CN103667082A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 常紅;白冰;高紅梅;趙源慧;李君海;吳小玲;楊喆茗
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林修正藥業(yè)新藥開發(fā)有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14
• 代理公司: 吉林省長春市新時代專利商標(biāo)代理有限公司 22204
• 代理人: 孫國振

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，具體涉及中藥原料藥蜜環(huán)菌濃縮液的制備方法。

背景技術(shù)：

蜜環(huán)菌[Armillaria?mellea(Vahl?ex?Fr.)Quel]是屬于白磨科(Trichol?omataceae)蜜環(huán)菌屬[Armillaria(Fr.)Staude.]的藥食兼用菌是一種與傳統(tǒng)中藥天麻(GastrodiaelataBlume)共生的著名的藥用真菌。經(jīng)國內(nèi)外多年的研究，分離得到了蜜環(huán)菌多糖、倍半萜類化合物和嘌呤類化合物等多種活性成分。蜜環(huán)菌子實體具有催眠、鎮(zhèn)靜、抗眩暈、改善心腦血液循環(huán)及較強(qiáng)的腦保護(hù)作用，可以治療多種疾病，并可提高機(jī)體免疫功能。蜜環(huán)菌是我國滋補(bǔ)保健類中藥材之一，倍受國內(nèi)外學(xué)者青睞。目前，蜜環(huán)菌已在藥品和保健食品領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，特別是以其為重要成分的中成藥腦心舒，在市場上頗有影響。蜜環(huán)菌是天麻的共生菌，有研究證明，蜜環(huán)菌的菌絲及發(fā)酵液有與天麻相類似的藥理作用。因此，加大蜜環(huán)菌液體發(fā)酵培養(yǎng)，優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)條件可滿足該品種的需求。但由于法定標(biāo)準(zhǔn)中對蜜環(huán)菌濃縮液的培養(yǎng)基組成不明確，現(xiàn)有的蜜環(huán)菌濃縮液制備方法存在培養(yǎng)周期長，腺苷含量不確定等不足，影響大規(guī)模的生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種蜜環(huán)菌濃縮液的制備方法，克服現(xiàn)有的濃縮液制備方法存在的上述不足。

本發(fā)明的蜜環(huán)菌濃縮液制備方法包括以下步驟：

1、將蜜環(huán)菌菌株接種到無菌培養(yǎng)基上，27℃±1℃培養(yǎng)3～4天，得到菌絲體備用；

2、制備無菌培養(yǎng)液：按重量份數(shù)比例取葡萄糖3～5份、蛋白胨1～3份、酵母浸膏1～3份、KH₂PO₄0.1～0.5份、MgSO₄0.1～0.5份、NaCl0.001～0.003份、維生素B10.05～0.1份，加入純化水100-150份后混合均勻。

3、發(fā)酵：將步驟1所得到的菌絲體接種于步驟2制得的液體培養(yǎng)液中，在27℃±1℃、轉(zhuǎn)速100rpm～500rpm、通氣量100～150L/h、PH值為5.0左右的條件下發(fā)酵3～5天；

4、濃縮：收集發(fā)酵液，將發(fā)酵液過濾后減壓濃縮至密度為1.030～1.035（20℃）即得。

本發(fā)明的積極效果是：明確了培養(yǎng)基組成，利于生產(chǎn)操作。縮短了生產(chǎn)周期，本發(fā)明周期6-9天，現(xiàn)有的方法10-13天。發(fā)酵液產(chǎn)量較高，是現(xiàn)有方法的1.15倍。發(fā)酵液中腺苷含量較原生產(chǎn)工藝高。本發(fā)明制備的蜜環(huán)菌濃縮液腺苷含量高于0.45mg/ml，現(xiàn)有方法制備的蜜環(huán)菌濃縮液腺苷含量低于0.40mg/ml.

具體實施方式

實施例1

1、將蜜環(huán)菌菌株接種到無菌培養(yǎng)基上，27℃±1℃培養(yǎng)3天得到菌絲體備用；

2、制備無菌培養(yǎng)液：按重量份數(shù)比例取葡萄糖3份、蛋白胨3份、酵母浸膏1份、KH₂PO₄0.1份、MgSO₄0.5份、NaCl0.003份、維生素B10.05份，加入純化水100份后混合均勻；

3、發(fā)酵：將菌絲體接種于液體培養(yǎng)液中，于27℃±1℃，轉(zhuǎn)速100rpm，通氣量100L/h，PH值為5.0左右發(fā)酵3天；濃縮：收集發(fā)酵液，將發(fā)酵液過濾后減壓濃縮至密度為1.032（20℃）即得。

實施例2

1、將蜜環(huán)菌菌株接種到無菌培養(yǎng)基上，27℃±1℃培養(yǎng)4天得到菌絲體備用；

2、制備無菌培養(yǎng)液：按重量份數(shù)比例取葡萄糖5份、蛋白胨1份、酵母浸膏3份、KH₂PO₄0.5份、MgSO₄0.1份、NaCl0.001份、維生素B10.1份，加入純化水150份后混合均勻。

3、發(fā)酵：將步驟1所得到的菌絲體接種于步驟2制得的液體培養(yǎng)液中，在27℃±1℃、轉(zhuǎn)速500rpm、通氣量150L/h、PH值5.0左右的條件下發(fā)酵5天；

4、濃縮：收集發(fā)酵液，將發(fā)酵液過濾后減壓濃縮至密度為1.030～1.035（20℃）即得。