[發明專利]截短表達的相思子毒素A鏈蛋白抗原及其應用

有效

• 申請號: 201310674693.8
• 申請日: 2013-12-11
• 公開（公告）號: CN103694326A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發明（設計）人: 王景林;張弢;康琳;高姍
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院微生物流行病研究所
• 主分類號: C07K14/415
• 分類號: C07K14/415;C12N15/29;C12N15/70;C12N1/21;A61K39/00;A61P39/02;C12R1/19
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• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及截短表達的相思子毒素A鏈蛋白抗原及其應用。

背景技術

隨著生物技術的快速發展和生物毒素的開發利用，毒素在大規模殺傷性武器中的重要性已凸現出來，生物毒素及其生物恐怖的威脅與日俱增。作為B類生物戰劑，相思子毒素被列入國際生物戰劑核查清單，它和蓖麻毒素在分子結構和作用機制上具有高度相似性，由A-B鏈結構組成（A鏈為效應鏈，具有RNA?N-糖苷酶活性；B鏈為結合鏈，介導A鏈進入細胞內發揮毒性作用）。相思子毒素小鼠腹腔LD₅₀為0.04μg/kg，其毒性是蓖麻毒素的75倍。相思豆主要分布在亞熱帶地區，在我國的南方有廣泛分布，常被用作裝飾品的制作，甚至能在淘寶網上都能購買到大量的原料，而且在許多公開的專業刊物和互聯網上都可以找到如何提取制備相思子毒素的詳細資料，因此其恐怖威脅不容易忽視。尤其是面對東突、疆獨、藏獨等恐怖極端分子危害人類的恐怖活動新動態，在我國不排除發生相思子毒素的生物恐怖襲擊可能性。

針對相思子毒素中毒，目前尚無預防疫苗、特異性抗毒素和解毒藥。通過分析現有的研究進展和成果，美軍的生防專家認為，疫苗研究是對抗其中毒的有效預防手段。因此，開展相思子毒素疫苗的研究，具有十分重要的軍事和社會意義。

我國學者對相思子毒素生物戰劑的偵檢工作有了初步的發展，而對其疫苗作為醫學防護的研究才剛剛起步，針對潛在相思子毒素的恐怖襲擊尚無有效的免疫治療和防護手段，因此迫切需要建立和發展具有自主知識產權的防護用品，保證及時采取應急措施和對策，將生物恐怖襲擊造成的破壞降低到最低限度。

發明內容

本發明的目的是提供一種截短表達的相思子毒素A鏈蛋白抗原及其應用。

本發明提供了一種蛋白質，命名為tATA4片段，是如下（a）或（b）或（c）或（d）：（a）由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質；（b）具有序列表的序列2所示的氨基酸序列的蛋白質；（c）由序列表中序列4所示的氨基酸序列組成的蛋白質；（d）將序列2或序列4的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列2或序列4衍生的蛋白質。

編碼所述tATA4片段的基因也屬于本發明的保護范圍。

所述基因具體可為如下（1）或（2）或（3）或（4）或（5）或（6）或（7）的DNA分子：（1）編碼區如序列表的序列1所示的DNA分子；（2）序列表的序列1所示的DNA分子；（3）具有序列表的序列1所示的核苷酸序列的DNA分子；（4）編碼區如序列表的序列3所示的DNA分子；（5）序列表的序列3所示的DNA分子；（6）在嚴格條件下與（1）或（2）或（3）或（4）或（5）限定的DNA序列雜交且編碼所述蛋白的DNA分子；（7）與（1）或（2）或（3）或（4）或（5）限定的DNA序列至少具有90%以上同源性且編碼所述蛋白的DNA分子。上述嚴格條件可為在6×SSC，0.5%SDS的溶液中，在65oC下雜交，然后用2×SSC、0.1%SDS和1×SSC、0.1%SDS各洗膜一次。

含有所述基因的表達盒、重組載體、轉基因細胞系或重組菌均屬于本發明的保護范圍。所述重組載體具體可為重組表達載體。所述重組表達載體具體可為在pET-His表達載體的多克隆位點（如EcoRⅠ和NheⅠ酶切位點之間）正向插入了序列表的序列1所示的雙鏈DNA分子得到的重組質粒。所述重組菌具體可為將所述重組質粒導入大腸桿菌BL21(DE3)得到的重組菌。

本發明還保護所述tATA4片段在制備相思子毒素疫苗中的應用。所述相思子毒素為天然相思子毒素和/或相思子毒素-a。

本發明還保護所述tATA4片段和佐劑在制備相思子毒素疫苗中的應用。所述相思子毒素為天然相思子毒素和/或相思子毒素-a。所述佐劑具體可為鋁佐劑。

本發明還保護一種相思子毒素疫苗，其活性成分為所述tATA4片段。所述疫苗還包括佐劑。所述佐劑具體可為鋁佐劑。所述相思子毒素為天然相思子毒素和/或相思子毒素-a。

本發明以相思子毒素的A鏈為基礎，從中截取得到了tATA4片段。與相思子毒素的A鏈相比，tATA4片段的毒性大幅降低，但保持了良好免疫原性。將tATA4片段免疫動物后，可以保護動物免受相思子毒素的攻擊致死作用。綜上所述，本發明提供的tATA4片段可以作為抵抗相思子毒素攻擊的疫苗的活性成分。

本發明具有重大的應用價值和深遠的應用前景。

附圖說明

圖1為pET-His表達載體的結構示意圖。