[發明專利]使大腸桿菌上的質粒進行轉化的方法

在審

• 申請號: 201310674251.3
• 申請日: 2013-12-02
• 公開（公告）號: CN103667333A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 仲集華
• 申請（專利權）人: 仲集華
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種實驗方法，具體來說，使大腸桿菌上的質粒進行轉化的方法。

背景技術

質粒是真核細胞細胞核外或原核生物擬核區外能夠進行自主復制的遺傳單位，包括真核生物的細胞器(主要指線粒體和葉綠體)中和細菌細胞擬核區以外的環狀脫氧核糖核酸(DNA)分子?，F在習慣上用來專指細菌(大腸桿菌)、酵母菌和放線菌等生物中細胞核或擬核中的DNA以外的DNA分子。在基因工程中質粒常被用做基因的載體(Vector)。許多細菌除了擬核中的DNA外，還有大量很小的環狀DNA分子，這就是質粒(plasmid)(補充：部分質粒為RNA)。質粒上常有抗生素的抗性基因，例如，四環素抗性基因或卡那霉素抗性基因等。有些質粒稱為附加體(episome)，這類質粒能夠整合進真菌的染色體，也能從整合位置上切離下來成為游離于染色體外的DNA分子。質粒在宿主細胞體內外都可復制，通過個些特性，人們可以把一些目的DNA片斷構建在質粒中，通過轉化入大腸桿菌中，不斷的復制，來得到目的產物。這就是轉化的目的。

發明內容

為克服上述技術問題，我們提出了以下技術方案：

使大腸桿菌上的質粒進行轉化的方法，步驟如下：

(1)將大腸桿菌用高濃度的氯化鈣溶液進行誘導，所獲得的的受體細胞使其成為感受態；

(2)用在涂布平白上進行篩選；

(3)冷激法，含有質粒DNA的細胞再進一步轉化成受體細胞；

(4)加入反應酶；

(5)緩沖液單獨滅菌；

(6)取感受態細胞；；冰h解凍30iTiin、加入al?pGEX-4T-l質粒載體；

(7)恒溫下過夜，即可本發明的有益效果是，實驗簡單，費用較低，抗體的制備為將來檢測臨床器官和人工肝中的PERV的表達及傳播具有重要意義。

具體實施方式

使大腸桿菌上的質粒進行轉化的方法，步驟如下：

(1)將大腸桿菌用高濃度的氯化鈣溶液進行誘導，所獲得的的受體細胞使其成為感受態；

(2)用在涂布平白上進行篩選；

(3)冷激法，含有質粒DNA的細胞再進一步轉化成受體細胞；

(4)加入反應酶；

(5)緩沖液單獨滅菌；

(6)取感受態細胞；；冰h解凍30iTiin、加入al?pGEX-4T-l質粒載體；

(7)恒溫下過夜，即可。

以上所述，僅為本發明較佳的具體實施方式，但本發明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本技術領域的技術人員在本發明披露的技術范圍內，根據本發明的技術方案及其發明構思加以等同替換或改變，都應涵蓋在本發明的保護范圍之內。