[發明專利]一種與雞背部羽毛成熟性相關的分子遺傳標記及其應用

有效

• 申請號: 201310673549.2
• 申請日: 2013-12-11
• 公開（公告）號: CN103695417A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發明（設計）人: 李華;李培周;于輝;鄺智祥
• 申請（專利權）人: 佛山科學技術學院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 廣州新諾專利商標事務所有限公司 44100
• 代理人: 許英偉

技術領域

本發明涉及雞背部羽毛成熟性相關的分子標記育種技術，具體涉及一種與雞背部羽毛成熟性相關的分子遺傳標記及其應用。

背景技術

優質肉雞是我國肉雞養殖業一大特色，隨著消費者生活水平的提高和受傳統消費習慣的影響，對優質雞體型外貌的要求也越來越嚴格。體型外貌和羽毛成熟性等包裝性狀可以反映出肉雞的飼養方式或飼養日齡。優質肉雞相較于其它快大型肉雞品種，其生長速度慢且早熟性差、上市日齡長、耗料量大。上市日齡雞羽毛發育均勻度較差為大多優質肉雞的一大缺點，羽毛成熟度是判斷肉雞性成熟的重要指標之一，人們通常習慣觀察雞背部羽毛間接判定肉雞品質和飼養日齡，劉清朝等（劉清朝，張德祥，黃軍，土雞羽毛成熟度的選育效果分析，中國家禽科學研究進展——第十四次全國家禽科學學術討論會論文集2009-07-01）以三黃雞為素材，采用傳統的選育方法，表明干毛組后代雞群的主翼羽脫換速度、早熟性、開產日齡以及干毛比例等性狀均優于未干毛組后代雞群，羽毛成熟性好的優質肉雞屠宰后胴體美觀。

血管內皮生長因子受體2（VEGFR2）為細胞特異性表面膜受體，為酪氨酸激酶受體，具有較高親和力，作為一種典型跨膜鑲嵌蛋白，主要分為胞外區、跨膜區和膜內區3部分。血管內皮生長因子（VEGF）生物學功能需與VEGFR2結合而產生，VEGFR-2基因上單核苷酸多態位點（SNP）可以通過影響結合效率或降低VEGFR2的轉錄活性進而影響生產性能和疾病。根據候選基因分析法的有關原理，VEGFR2基因篩選為優質雞羽毛成熟性的理想分子標記。

雞羽毛成熟度包含多個性狀，其中“干毛”是指優質雞體羽發育成熟時的羽毛特征，此時羽毛根部毛管收縮、中空透明、不含羽髓液。上市優質雞體羽干毛程度很大程度上影響售價。常規的“干毛”數量遺傳的選育通過主翼羽肉眼觀察評分，但通過背部羽毛和分子標記輔助選擇的方法評判雞羽毛成熟度尚無報道，分子標記具有早期選育、快速高效等特點。

發明內容

本發明一方面提供一種與雞背部羽毛成熟性相關的遺傳標記，通過該遺傳標記可以預測雞的背部羽毛成熟度性狀（干毛性狀），從而可用于優質雞羽毛成熟性的分子標記輔助育種。

本發明通過以下技術方案實現：

本發明提供一種與雞背部羽毛成熟性相關的分子遺傳標記，其是與雞羽毛成熟度相關的VEGFR2基因上的4個多態位點，分別是exon5-A160G、intron7-C1469G、exon10-A69G和exon9-C88T，分子遺傳標記包含如序列表中序列1～4所示的核苷酸序列。其中，序列1的第140bp處有一個A/G突變（在序列表序列1中標注為r），序列2的第132bp處有一個C/G突變（在序列表序列2中標注為s），序列3的第110bp處有一個A/G突變（在序列表序列3中標注為r），序列4的第490bp處有一個C/T突變（在序列表序列4中標注為y）。

本發明第二方面還提供4對引物，包括分別用于擴增序列表中序列1～4所示核苷酸序列的4對引物M1、M2、M3、R5，4對引物的序列分別如下：

1）引物M1----上游引物：TGTTCCTGATGGCAAATCAA；下游引物：TGGGTCACCATGCTGTAGAA；

2）引物M2----上游引物：TGTTCAAGGGAAAGGACTGG；下游引物：ACCATTTTGCCTCTGGAGAA；

3）引物M3----上游引物：GAAGCCTTGTGGGAGGTGTA；下游引物：AGCTGCCAATACCACAGGAC；

4）引物R5----上游引物：TGTTCAAGGGAAAGGACTGG；下游引物：CTCTACCACCCATCCTGGAG。

篩選與雞的背部羽毛成熟性相關的上述遺傳標記的方法，包括如下步驟：從雞血液中提取基因組DNA，用上文所述的4對引物分別在雞的基因組DNA中進行PCR擴增，對PCR擴增產物純化和克隆測序，獲得如序列表中序列1～4所示的核苷酸序列。

本發明提供了鑒定上述序列1第140bp處A/G突變、序列2第132bp處C/G突變、序列3第110bp處A/G突變的PCR‐SSCP分型方法，其步驟包括：分別用引物M1、M2、M3在雞基因組DNA中進行PCR擴增，分別將3μL?M1、M2、M3的PCR擴增產物與7μL?SSCP上樣緩沖液混合，在PCR儀上95℃變性10min，立即取出于冰上放置5min，進行聚丙烯酰胺凝膠電泳分型。