[發明專利]基于EST-SSR標記鑒定枇杷品種的方法

有效

• 申請號: 201310671755.X
• 申請日: 2013-12-03
• 公開（公告）號: CN103667487A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 李曉穎;陳俊偉;徐紅霞
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于EST-SSR標記鑒定枇杷品種的方法，其特征在于：所用來鑒定枇杷品種的引物是通過針對枇杷EST序列設計的SSR引物，經3次篩選出條帶清晰、多態性好的引物，具體包括：

2.根據權利要求1所述的基于EST-SSR標記鑒定枇杷品種的方法，其特征在于：具體包括如下步驟：

(1)提取需要進行鑒定、區分的枇杷DNA，稀釋備用；

(2)利用引物EJ-38對枇杷DNA進行PCR擴增并進行PAGE凝膠檢測，在223bp、227bp都出現特征性譜帶，而245bp無特征性譜帶，1.‘大五星’、13.‘六分種’、17.‘尖頭大紅袍’三個枇杷品種被分成A組；在227bp、245bp都出現特征性譜帶，在223bp無特征性譜帶，3.‘寧海白’、4.‘溪上白沙’、6.‘荸薺種’、7.‘冠玉’、10.‘白玉’、14.‘白毛五兒’六個枇杷品種被分為B組；在223bp、227bp都無特征性譜帶，只在245bp出現特征性譜帶，編號為5.‘洛陽青’、9.‘青種’、11.‘甜種’、15.‘大玫瑰紅袍’、18.‘寶珠’五個枇杷品種被分成C組；在223bp、245bp都無特征性譜帶，只在227bp出現特征性譜帶，編號為8.‘雞蛋白’、16.‘大葉楊墩’兩個枇杷品種被分成D組；在223bp、227bp、245bp都無特征性譜帶，編號為2.‘大房’12.‘遲紅’兩個枇杷品種被分成E組，并進入步驟(3)；

(3)進一步利用引物EJ-25進行PCR擴增并進行PAGE凝膠檢測，根據在160bp、210bp、216bp和220bp出現的特征性譜帶區分A、B、C、D、E五組中的枇杷品種：

在A組中，在160bp處無特征帶、而在210bp處出現特征性譜帶則品種1.‘大五星’被區分出來；若在160bp、220bp都出現特征性譜帶則品種13.‘六分種’被區分出來；在160bp、210bp都出現特征性譜帶則品種17.‘尖頭大紅袍’被區分出來；

在B組中，在216bp都出現特征性譜帶，則品種7.‘冠玉’被區分出來，而3.‘寧海白’、4.‘溪上白沙’、6.‘荸薺種’、10.‘白玉’、14.‘白毛五兒’五個品種在216bp無特征性譜帶，進入步驟(4)；

在C組中，在220bp有特征性譜帶，在160bp處無特征帶，品種11.‘甜種’被區分鑒定出來；而在210bp有特征性譜帶，在160bp處無特征帶，品種18.‘寶珠’被鑒定出，其余三個品種5.‘洛陽青’、9.‘青種’、15.‘大玫瑰紅袍’僅在160bp有特征帶，則進入步驟(4)；

在D組中，在160bp處無特征帶，品種8.‘雞蛋白’被區分鑒定出來；而在160bp處有特征性譜帶的，品種16.‘大葉楊墩’則被區分出來；

在E組中，在210bp無特征性譜帶，品種2.‘大房’被區分鑒定出來；而在210bp處有特征性譜帶的，品種12.‘遲紅’被鑒定出來；

(4)利用引物EJ-20進行PCR擴增，并進行PAGE凝膠檢測，

在B組中，在200bp處出現特征性譜帶，品種3.‘寧海白’、6.‘荸薺種’、14.‘白毛五兒’三個品種被分為一組；品種4.‘溪上白沙’和10.‘白玉’在200bp處無特征性譜帶，被分為另一組，繼續進入步驟(5)；

在C組中，在200bp有特征性譜帶，品種15.‘大玫瑰紅袍’被鑒定出來，而品種5.‘洛陽青’和9.‘青種’則進入步驟(5)；

(5)利用引物EJ-16和EJ-40分別進行PCR擴增，并進行PAGE凝膠檢測，

在B組中，利用引物EJ-40對品種3.‘寧海白’、6.‘荸薺種’、14.‘白毛五兒’三個品種進行擴增并檢測，在236bp、238bp處均出現特征性譜帶的，品種3.‘寧海白’被鑒定出來；僅在236bp處出現特征性譜帶，而在238bp處無特異譜帶的為品種14.‘白毛五兒’；僅在238bp處出現特征性譜帶，而在236bp處無特異譜帶的為品種6.‘荸薺種’；

利用引物EJ-16對品種4.‘溪上白沙’和10.‘白玉’進行擴增并PAGE檢測，在172bp處出現特征性譜帶的，為品種4.‘溪上白沙’；而無該特異條帶的則為品種10.‘白玉’，至此B組所有枇杷品種都被鑒定出來；

在C組中，利用引物EJ-16對品種5.‘洛陽青’和9.‘青種’擴增并進行PAGE檢測，在172bp處出現特征性譜帶的，為品種9.‘青種’；而無該特異條帶的則為品種5.‘洛陽青’，至此C組所有枇杷品種也都被鑒定出來。