[發明專利]一種HDAC10基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應用

在審

• 申請號: 201310669534.9
• 申請日: 2013-12-11
• 公開（公告）號: CN104711322A
• 公開（公告）日: 2015-06-17
• 發明（設計）人: 張云福;張玉麗;裘建英;裘霖
• 申請（專利權）人: 芮屈生物技術（上海）有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海翼勝專利商標事務所(普通合伙) 31218
• 代理人: 翟羽

技術領域

本發明涉及一種試劑盒，具體地說關于一種HDAC10基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應用。

背景技術

宮頸癌（Cervical?cancer）是一種常見的婦科惡性腫瘤。侵襲和遠端轉移這種重要事件的發生，影響了宮頸癌的預后和治療。在宮頸癌的極早期，超過90%的婦女在確診后能夠生存至少5年。而晚期宮頸癌發生侵襲或轉移則前景顯著較差。不到20%的IV期宮頸癌婦女能夠生存5年或以上。一些宮頸癌細胞能通過淋巴結或血液循環轉移，并形成繼發性癌癥。它們最常擴散至肝臟、肺和骨骼處。因此，了解細胞侵襲及轉移的分子和細胞機制對于開發有效的宮頸癌治療，提高患者生存率具有重要的意義.?

異常的HDACs表達往往與癌癥發生和臨床預后相關。HDACs的主要功能是去除組蛋白N-乙酰基賴氨酸上的乙酰基，由此改變染色質結構以及調節基因轉錄。HDACs可以調控癌癥相關基因的表達，因此它們是一類有前景的抗癌藥物靶點。幾種HDAC抑制劑已應用于臨床癌癥治療或是進入到臨床試驗階段。它們通過抑制癌細胞增殖、遷移和血管生成多種機制來抑制癌癥發生。HDAC家族根據結構和同源性可以分為I-IV類18種蛋白，HDAC10是IIb類HDAC。然而相比于許多其他的HDACs，HDAC10在癌癥中的功能并不為人所知。

在這篇文章中研究人員報告稱，發現相比于無淋巴結轉移的人類子宮頸鱗狀細胞癌患者，有淋巴結轉移的患者體內HDAC10表達水平顯著較低。在宮頸癌細胞中外源性表達HDAC10，可顯著抑制體內外的細胞運動，侵襲及轉移。

機制研究證實，HDAC10抑制了基質金屬蛋白酶MMP2和MMP9表達，眾所周知后兩者對于癌細胞侵襲和轉移至關重要。在分子水平上，HDAC10與MMP2和MMP9的啟動子區域結合，降低了組蛋白乙酰化水平，抑制了RNA聚合酶II與這些區域結合。研究人員利用一個缺乏組蛋白脫乙酰基酶活性的HDAC10突變體，證實其無法模擬出全長蛋白質的功能。

這些結果確定了HDAC10在抑制宮頸癌轉移中發揮了關鍵的作用，強調了研發亞型特異性HDAC抑制劑來治療如子宮頸鱗狀細胞癌等某些類型癌癥的重要意義。

隨著分子生物技術日益完善，功能基因組學，癌癥基因組學等研究的深入展開，至今，我們已有可能在基因水平上做更精確的早期診斷，在癌變前期或癌細胞形成（單克隆時）就能做到早期預測診斷。

原位雜交技術（in?situ?hybridization）是將分子生物學與細胞化學技術結合起來，以標記的核酸分子為探針，在組織細胞原位檢測特異性核酸分子的技術。其原理是使含有特異序列、經過標記的核酸單鏈（即探針），在適宜條件下與組織細胞中的互補核酸單鏈即靶核酸發生雜交，再以放射自顯影或免疫細胞化學方法對標記探針進行探測，從而在細胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種HDAC10基因的原位雜交檢測試劑盒的用途。

本發明的再一的目的是，提供一種HDAC10基因的原位雜交檢測試劑盒。

本發明的另一的目的是，提供一種HDAC10基因的原位雜交檢測方法。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案是：

一種HDAC10基因的原位雜交檢測試劑盒在制備檢測子宮頸癌疾病藥物中的應用，所述的試劑盒包括雜交探針、標記物，所述的雜交探針序列如SEQ?ID?NO：AF426160的全長2420bp，CDS中的一段，從601-1081bp，在染色體22q13”。

所述的雜交探針序列如SEQ?ID：AF426160所示的mRNA序列，cds中一段。

所述的標記物選自放射性核素或非放射性標記物。

所述的放射性核素選自³H、³⁵S、¹²⁵I或^?32P中的一種。

所述的非放射性標記物選自生物素、地高辛、堿性磷酸酶、辣根過氧化酶或熒光素中的一種。

所述的非放射性標記物優選自地高辛。

所述的試劑盒還包括增效劑，所述的增效劑是堿性磷酸酶抗體。

為實現上述第二個目的，本發明采取的技術方案是：

一種HDAC10基因的原位雜交檢測試劑盒，包括雜交探針、標記物，其中所述的雜交探針序列如SEQ?ID?NO：AF42616，為實現上述第三個目的，本發明采取的技術方案是：

一種HDAC10基因的原位雜交檢測方法，該方法包括以下步驟：