[發明專利]胃癌病理演變前期miRNA-200c水平原位雜交檢測試劑盒及檢測方法和應用

在審

• 申請號: 201310669531.5
• 申請日: 2013-12-11
• 公開（公告）號: CN104711321A
• 公開（公告）日: 2015-06-17
• 發明（設計）人: 裘建英;張玉麗;張云福;裘霖
• 申請（專利權）人: 芮屈生物技術（上海）有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海翼勝專利商標事務所(普通合伙) 31218
• 代理人: 翟羽

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，更具體地說，是涉及與胃癌病理演變mRNA表達改變(病理演變過程)的相關檢測技術。

背景技術

根據國內外權威機構提供的資料，我國每年癌癥的新增人數260萬，死亡人數近210萬，患者700多萬，全球每年新增癌癥患者800萬，死亡人數接近800萬，患者約有8400多萬人，到2020年以上人數將翻一番，這是一組可怕的數字。癌癥診治成本越來越高，按癌癥患者的年治療費用20萬（貧窮地區可能偏高，發達地區可能遠遠高出20萬），700多萬患者，每年的花費是1.4萬億人民幣，扣除成本35%約4千億，每年約有1萬億人民幣白白消耗了。而且，癌癥患者大部分會在治療后不久死亡。因此，現有的臨床癌癥診治模式一定要改變，本發明的創新點是提前做到預防性篩查，然后及時介入預防性調控和預防性治療，做到基因水平癌癥的治未病。

2005年美國衛生研究院、癌癥研究院、疾控中心等八家單位做了一個年度報告，對1972年發起的抗癌大戰進行回顧，報告認為人類在抗癌大戰中是失敗，結論是癌癥死亡率沒有降低，其列舉出造成抗癌大戰失敗的幾個因素是：1.腫瘤細胞異質性（多態性）；2.腫瘤細胞耐藥性；3.抗癌藥物設計思路不完善（動物模型設計不科學）等。同時，該報告中亦提出應重新審視現有診治癌癥的措施。

本發明人在長期研究中發現，導致癌癥死亡率不降的重要原因是不能做到真正的早期診斷。依照現有的臨床醫學影像（B超、CT、核磁共振成像等）及和其它生化（癌抗原、癌胚抗原、糖類激素、細胞膜因子、細胞核因子、細胞流式技術）指標來診斷癌癥，都是腫瘤形成后診斷，前者要有組織學變化或已有占位性病變，后者大部分是腫瘤形成后所分泌、釋放、或腫瘤的標記物。傳統臨床觀念認為占位性癌塊在2公分下是屬于早期癌癥的診斷，這一概念值得認真討論，2公分以下癌塊屬早期這一界定科學性是不夠嚴謹的，從細胞學角度來分析，1公分的腫塊約有一億個腫瘤細胞，2公分的腫塊其三維空間的細胞疊加數遠不止2億個腫瘤細胞，從癌變前期到單克隆癌細胞產生及形成2公分的癌塊，其病理演變過程相當長，可能是5年或10年、甚至是10年以上（特殊病例除外），很難證實的是在這個病理演變過程中，腫塊是癌癥唯一的發生地和單獨的病灶，可能癌細胞早已遷移到其它組織或器官生長。臨床研究早已證實，一旦形成腫塊的同時，其它癌細胞通過不同途徑遷移到其它部位克隆生長，一旦切除原發灶后，其它器官復發灶或多發癌塊灶先后形成。因此，在臨床上以2公分以下的癌腫塊大小來界定早期與否，不夠嚴謹（有些病例，在發現原發病灶時，同時發現轉移病灶，不在我們表述的內容中），其實這時已經是晚期診斷和晚期治療，這是導致癌癥死亡率不降的真正原因。

隨著分子生物技術日益完善，功能基因組學，癌癥基因組學等研究的深入展開，為了尋求更早期的診斷癌癥、治療癌癥、以及預防癌癥，已取得長足進步。至今，我們已有可能在基因的一級轉錄功能產物（mRNA水平或microRNA）上做更精確的早期篩查和診斷，在癌變前期或癌細胞形成（單克隆）前,就可以做到早期預測和篩查。

微小核醣核酸(microRNA/miRNA)是一段長度約為22核苷酸的寡核醣?核酸分子，它們可以藉由調控mRNA來抑制轉譯作用或是造成mRNA的降解來降低基因的表現。近來有許多研究發現，miRNA與癌癥具有高度的相關性。因此推論miRNA可能是癌化過程的一個導因。到目前為止，在人體上有超過700個miRNA被發現，而大約有100左右的miRNA被確認與人類癌癥具有相關性，這其中包含有食道癌、乳癌、血癌、肺癌、腦癌、肝癌、直腸結腸癌、膠質細胞瘤、垂體瘤等多種腫瘤在食道癌細胞中，miR-17-92家族等microRNA在多種腫瘤中表達上調。種miR-21在成膠質細胞瘤、乳腺癌、胰腺癌、結腸癌、肝癌、肺癌、前列腺癌、胃癌等多惡性腫瘤中上調表達。

雖然腫瘤組織microRNA表達譜與腫瘤發病及預后相關，但是檢測技術復雜、創傷大，難以真正應用于臨床診斷。相比較而言，外周血血清較易獲得和檢測，臨床應用便捷，利于推廣。血清中是否存在血清microRNA的表達譜與對應腫瘤組織microRNA表達譜關聯？2008年至今已報道多項血清microRNA與腫瘤關系的研究工作，為血清microRNA作為分子標記應用于腫瘤的早期診斷和預后提供了工作基礎。??????