[發明專利]稻瘟病抗性基因Pi63的功能特異性分子標記及其方法與應用

有效

• 申請號: 201310669214.3
• 申請日: 2013-12-11
• 公開（公告）號: CN103642803A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發明（設計）人: 萬建民;雷財林;馬建;馬小定;程治軍;王久林;張欣;郭秀平;王潔;趙志超;吳赴清;林啟冰
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院作物科學研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 北京知本村知識產權代理事務所 11039
• 代理人: 劉江良

1.稻瘟病抗性基因Pi63的功能特異性分子標記YRT3或YRT4，其特征在于：分子標記YRT3是通過正向引物如SEQ?ID?NO.?1所示序列和反向引物如SEQ?ID?NO.?2所示序列從水稻總DNA中擴增出來的核苷酸序列，并經特異性酶切后再電泳檢測到的與稻瘟病抗性基因Pi63呈特異性帶型的分子標記；分子標記YRT4是通過正向引物如SEQ?ID?NO.?3所示序列和反向引物如SEQ?ID?NO.?4所示序列從水稻總DNA中擴增出來的核苷酸序列，經直接電泳檢測到的與稻瘟病抗性基因Pi63呈特異性帶型的分子標記；

其中，所述的水稻為水稻品種為羊毛谷（YMG）。

2.根據權利要求1所述的稻瘟病抗性基因Pi63的功能性分子標記YRT3或YRT4，其特征在于：所述的稻瘟病抗性基因Pi63的DNA序列如SEQ?ID?NO.?5所示，所述的稻瘟病抗性基因Pi63的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.?7所示。

3.根據權利要求1所述的稻瘟病抗性基因Pi63的功能性分子標記YRT3或YRT4，其特征在于：通過引物對SEQ?ID?NO.?1和SEQ?ID?NO.?2從水稻總DNA中擴增出來的PCR產物大小為1449?bp，并經特異性酶AseI酶切后成為2個片段，大小為908?bp和541bp；通過引物對SEQ?ID?NO.?3和SEQ?ID?NO.4從水稻總DNA中擴增出來的PCR產物大小為421?bp。

4.一種利用權利要求1～3任一項所述的稻瘟病抗性基因Pi63的功能性分子標記YRT3或YRT4鑒別或篩選含有稻瘟病抗性基因Pi63的水稻品種的方法，其特征在于：

以待測水稻植株或品種的總DNA為模板，采用如SEQ?ID?NO.1和?2所示序列的引物對進行PCR擴增，如果得到的擴增產物大小為1449?bp，并經特異性酶AseI酶切后成為2個片段，大小為908?bp和541bp，則待測水稻植株或品種含有稻瘟病抗性基因Pi63；或

以待測水稻植株或品種的總DNA為模板，采用如SEQ?ID?NO.3和?4所示序列的引物對進行PCR擴增，如果得到的擴增產物大小為421?bp，則待測水稻植株或品種含有稻瘟病抗性基因Pi63。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：采用如SEQ?ID?NO.1和?2所示序列的引物對進行PCR擴增，所述的PCR擴增，其中擴增產物A的PCR反應體系如下：2×?PCR?Buffer?for?KOD?FX?10?μl，?dNTPs?(2?mM?each)?4?μl，引物?(1?0pmol,?F+R)?1?μl，?KOD?FX酶（1?U/μl,?TOYOBO）0.4?μl，DNA模板（100?ng/μl）2?μl，加ddH₂O至20?μl，擴增反應條件：94℃?2?min；98℃?10?s?→?59℃?1.5?min?→?68℃?5?min，35個循環；?68℃?5?min，10℃保存；采用如SEQ?ID?NO.3和?4所示序列的引物對進行PCR擴增，?PCR反應體系如下：2?×?PCR?Buffer?for?KOD?FX?10?μl，2mM?dNTPs?4?μl，10pmol引物1?μl，1U/μl?KOD?FX酶0.4?μl，100ng/μl?DNA模板2?μl，加ddH₂O至20?μl，擴增反應條件：94℃?2?min；98℃?10?s?→?59℃?40?s?→?68℃?5?min，35個循環；68℃?5?min，10℃保存。

6.權利要求1～3任一項所述的稻瘟病抗性基因Pi63的功能性分子標記YRT3或YRT4的應用，其特征在于：利用所述的稻瘟病抗性基因Pi63的功能性分子標記YRT3或YRT4在分子標記輔助育種、基因聚合育種以及轉基因育種中的應用。