[發(fā)明專利]一種中華鱉脂肪酸分析方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310668383.5
• 申請日: 2013-12-11
• 公開（公告）號: CN103675136A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 焦豐龍;洪一江;魏遠(yuǎn)隆;王軍花;盛軍慶;王誠遠(yuǎn);侯喜洋
• 申請（專利權(quán)）人: 南昌大學(xué)
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 南昌新天下專利商標(biāo)代理有限公司 36115
• 代理人: 施秀瑾

技術(shù)領(lǐng)域：本分明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，特別涉及采用氣相色譜質(zhì)譜結(jié)合保留指數(shù)法進(jìn)行中華鱉脂肪酸分析的方法。

背景技術(shù)：

中華鱉隸屬爬行綱、龜鱉目、鱉科、鱉屬，廣泛分布于我國除新疆、西藏，青海以外的其他省份，為我國名貴的水生爬行動物。中華鱉肉質(zhì)細(xì)嫩、營養(yǎng)豐富、高蛋白，備受國內(nèi)外消費(fèi)者的青睞。中華鱉除了營養(yǎng)美味外，還具有較高的藥用價值。據(jù)《名醫(yī)別錄》記載，鱉性味甘，平，有滋陰補(bǔ)腎，清退虛熱的功效，鱉甲、鱉血更具有治療陰虛以及補(bǔ)血的藥用功效，為食療佳品。中華鱉脂肪中富含EPA、DHA等不飽和脂肪酸，具有抗癌、促進(jìn)生長發(fā)育、增強(qiáng)記憶力等功效，臨床上已被用于治療高血壓、糖尿病等疾病。白晶等采用超臨界CO2萃取技術(shù)，利用低溫濃縮工藝從中華鱉油中提取到DHA和EPA，得到中華鱉油中EPA+DHA的含量為26.39%。Li-Hsun?Chang等用超臨界CO2法從中華鱉脂肪酸中提取不飽和脂肪酸，Chen-Huei?Huang等發(fā)現(xiàn)中華鱉自身可以合成18個碳以下的脂肪酸，但是不能合成高不飽和度的脂肪酸，同時發(fā)現(xiàn)中華鱉體內(nèi)不飽和脂肪酸占總脂肪酸的70%以上。通過分析中華鱉脂肪中脂肪酸的組成尤其是不飽和脂肪酸的組成，為中華鱉脂肪的合理利用提供依據(jù)。

氣相色譜質(zhì)譜（GC-MS）結(jié)合質(zhì)譜譜庫檢索方法是將組分的質(zhì)譜峰與質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫圖譜進(jìn)行匹配比對，以匹配度高的化合物作為鑒定結(jié)果，已被廣泛應(yīng)用于動植物脂肪酸的分析。由于脂肪酸種類較多，從結(jié)構(gòu)上分類主要有直鏈脂肪酸、支鏈脂肪酸和復(fù)雜形勢的脂肪酸三種類型，脂肪酸的鏈長、雙鍵位置和數(shù)量以及取代基團(tuán)不同均會導(dǎo)致分離的不準(zhǔn)確，尤其是長鏈脂肪酸結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜經(jīng)常會有同分異構(gòu)體存在，以及受分離度和色譜條件變化等因素的影響，會使脂肪酸的質(zhì)譜圖檢索結(jié)果出現(xiàn)偏差，使得難以準(zhǔn)確定性，甚至出現(xiàn)錯誤。為提高鑒定的準(zhǔn)確性，采用保留指數(shù)和質(zhì)譜檢索相結(jié)合的改良方法可顯著越來越多地應(yīng)用于定性定量分析中。采用液-液萃取法從中華鱉脂肪中提取脂肪酸并進(jìn)行甲酯化衍生，然后通過氣相色譜質(zhì)譜（GC-MS）譜庫檢索結(jié)合保留指數(shù)，對中華鱉的脂肪酸進(jìn)行定性定量分析，以鑒別中華鱉脂肪中的脂肪酸組成。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明氣相色譜質(zhì)譜結(jié)合保留指數(shù)分析方法分析中華鱉脂肪，得到了其精確地脂肪酸總離子流色譜圖、相應(yīng)的質(zhì)譜圖和保留指數(shù)。通過比較脂肪酸甲酯的質(zhì)譜譜庫結(jié)構(gòu)和相應(yīng)的保留指數(shù)，可以對中華鱉脂肪酸進(jìn)行定性分析。

本發(fā)明的方法包括以下步驟：一種中華鱉脂肪酸分析方法，包括以下步驟：

（1）中華鱉宰殺后取脂肪組織10?g，?-18?℃保存；

（2）稱取甲魚脂肪1?g，碾碎后放入10?mL玻璃試管中，加入10?mL提取液，混勻后密封浸提24?h；提取完成后，用不含脂肪的濾紙過濾，再加入5?mL提取液沖洗殘?jiān)?次濾液合并保存；所述提取液為體積比為2:1的氯仿：甲醇；

（3）取脂肪提取液5?mL，加入3?mL?10%?KOH甲醇溶液，混勻后，置于80?℃水浴反應(yīng)1?h；室溫冷卻后，加入3?mL?14%?BF₃甲醇溶液?(v/v)混勻后，于50?℃水浴反應(yīng)10?min；冷卻后，加入3?mL正己烷，震蕩渦旋，室溫靜置過夜；取上層正己烷層至進(jìn)樣小瓶，-18?℃冷凍，待GC-MS分析；

（4）將進(jìn)樣瓶中的脂肪酸甲酯進(jìn)行氣相色譜質(zhì)譜分析，色譜條件：色譜柱為安捷倫DB-5MS石英毛細(xì)管柱30.0?m×0.25?mm×0.25?μm；載氣為高純氦氣；流速1?mL/min；程序升溫：60?℃保持1?min，以10?℃/min?升至160?℃并保持4?min，以5℃/min升至260?℃并保持5min，以5?℃/min升至280?℃并保持1?min；分流比20:1；進(jìn)樣量1?μL；質(zhì)譜條件：EI離子源；電子能量70?eV；離子源溫度220?℃；進(jìn)樣口溫度240℃，質(zhì)量掃描范圍：m/z?40~600；溶劑切除時間2.5?min。

在進(jìn)行氣相色譜質(zhì)譜分析之后，還包括對分析的脂肪酸甲酯計(jì)算保留指數(shù)進(jìn)行計(jì)算的步驟：

（1）將正構(gòu)烷烴混合標(biāo)準(zhǔn)品（C8-C40）以脂肪酸甲酯分析的條件進(jìn)行氣相色譜質(zhì)譜分析；

（2）記錄每個正構(gòu)烷烴標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間；采用保留指數(shù)的線性升溫公式：????????????????????????????????????????????????計(jì)算各組分的RI值，其中：t_x、t_n和t_(n+1)分別為被分析組分和碳原子數(shù)處于n和n+1之間的正構(gòu)烷烴混標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品的流出峰保留時間（min）；