[發明專利]禽流感病毒miRNA及其鑒定、檢測和應用

在審

• 申請號: 201310664639.5
• 申請日: 2013-12-09
• 公開（公告）號: CN104694541A
• 公開（公告）日: 2015-06-10
• 發明（設計）人: 張辰宇;曾科;王進;李西漢
• 申請（專利權）人: 江蘇命碼生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/63;C12Q1/70;C12Q1/68;A61K45/00;A61P31/16
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 崔佳佳;馬莉華

1.一種分離的miRNA，其特征在于，所述的miRNA選自：

(i)序列如SEQ?ID?NO:1、2或3所示的miRNA，或

(ii)長度為20-26nt，且具有SEQ?ID?NO.:4所示核心序列的miRNA；或

(iii)與(i)或(ii)中所述miRNA的核苷酸序列互補的miRNA。

2.如權利要求1所述的miRNA，其特征在于，所述的miRNA來自禽流感病毒，較佳地來自禽流感病毒H5N1。

3.一種分離的或人工構建的前體miRNA，所述的前體miRNA能在動物細胞內剪切并表達成如權利要求1所述的miRNA。

4.一種分離的多核苷酸，所述的多核苷酸能被動物細胞轉錄成前體miRNA，所述的前體miRNA能在人細胞內被剪切且表達成如權利要求1所述的miRNA。

5.如權利要求4所述的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸具有式I所示的結構：

式I中，

Seq_正向為能在動物細胞中表達成所述的miRNA的核苷酸序列；

Seq_反向為與Seq_正向基本上互補或完全互補的核苷酸序列；

X為位于Seq_正向和Seq_反向之間的間隔序列，并且所述間隔序列與Seq_正向和Seq_反向不互補；

并且式I所示的結構在轉入人細胞后，形成式II所示的二級結構：

式II中，Seq_正向、Seq_反向和X的定義如上述，

||表示在Seq_正向和Seq_反向之間形成的堿基互補配對關系。

6.一種載體，其特征在于，所述載體含有權利要求1所述的miRNA，或權利要求4或5所述的多核苷酸。

7.權利要求1所述miRNA的用途，其特征在于，用于(a)制備檢測禽流感的試劑、檢測芯片或試劑盒；(b)制備調控PCBP2表達或活性的調節劑；(c)制備調控細胞因子表達的試劑。

8.一種核酸芯片，其特征在于，所述的核酸芯片包括：

固相載體；以及

有序固定在所述固相載體上的寡核苷酸探針，所述的寡核苷酸探針特異性捕獲權利要求1所述的miRNA。

9.一種試劑盒，所述的試劑盒中含有權利要求8所述的miRNA芯片或權利要求1所述的miRNA。

10.一種特異性抑制或阻斷權利要求1所述的miRNA的抑制劑；以及所述的miRNA的抑制劑的用途，其特征在于，用于制備(a)治療禽流感的藥物，(b)緩解禽流感癥狀的藥物，(c)減少宿主動物中禽流感病毒數量的藥物，(d)降低禽流感死亡率的藥物，(e)降低過度免疫的藥物。

11.一種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包括藥學上可接受的載體和特異性抑制或阻斷權利要求1所述的miRNA的抑制劑。

12.一種篩選用于治療禽流感的候選藥物的方法，其特征在于，包括步驟：

(a)提供一測試組和一對照組，其中在所述測試組中將候選物質施用于測試組的細胞或動物，并測定施用后所述測試組中miR-HA-3p的表達水平，而所述的對照組采用與測試組相同的條件，但不將候選物質施用于對照組的細胞或動物；

(b)將測試組的miR-HA-3p與對照組的miR-HA-3p的表達水平進行比較；

其中，當測試組的miR-HA-3p的表達水平顯著低于對照組的miR-HA-3p的表達水平時，則表明該候選物質是用于治療禽流感的候選藥物。