[發(fā)明專(zhuān)利]禽流感病毒miRNA及其鑒定、檢測(cè)和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310664639.5
• 申請(qǐng)日: 2013-12-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104694541A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-06-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張辰宇;曾科;王進(jìn);李西漢
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江蘇命碼生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/113
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/113;C12N15/63;C12Q1/70;C12Q1/68;A61K45/00;A61P31/16
• 代理公司: 上海一平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 崔佳佳;馬莉華

1.一種分離的miRNA，其特征在于，所述的miRNA選自：

(i)序列如SEQ?ID?NO:1、2或3所示的miRNA，或

(ii)長(zhǎng)度為20-26nt，且具有SEQ?ID?NO.:4所示核心序列的miRNA；或

(iii)與(i)或(ii)中所述miRNA的核苷酸序列互補(bǔ)的miRNA。

2.如權(quán)利要求1所述的miRNA，其特征在于，所述的miRNA來(lái)自禽流感病毒，較佳地來(lái)自禽流感病毒H5N1。

3.一種分離的或人工構(gòu)建的前體miRNA，所述的前體miRNA能在動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)剪切并表達(dá)成如權(quán)利要求1所述的miRNA。

4.一種分離的多核苷酸，所述的多核苷酸能被動(dòng)物細(xì)胞轉(zhuǎn)錄成前體miRNA，所述的前體miRNA能在人細(xì)胞內(nèi)被剪切且表達(dá)成如權(quán)利要求1所述的miRNA。

5.如權(quán)利要求4所述的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸具有式I所示的結(jié)構(gòu)：

式I中，

Seq_正向為能在動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)成所述的miRNA的核苷酸序列；

Seq_反向為與Seq_正向基本上互補(bǔ)或完全互補(bǔ)的核苷酸序列；

X為位于Seq_正向和Seq_反向之間的間隔序列，并且所述間隔序列與Seq_正向和Seq_反向不互補(bǔ)；

并且式I所示的結(jié)構(gòu)在轉(zhuǎn)入人細(xì)胞后，形成式II所示的二級(jí)結(jié)構(gòu)：

式II中，Seq_正向、Seq_反向和X的定義如上述，

||表示在Seq_正向和Seq_反向之間形成的堿基互補(bǔ)配對(duì)關(guān)系。

6.一種載體，其特征在于，所述載體含有權(quán)利要求1所述的miRNA，或權(quán)利要求4或5所述的多核苷酸。

7.權(quán)利要求1所述miRNA的用途，其特征在于，用于(a)制備檢測(cè)禽流感的試劑、檢測(cè)芯片或試劑盒；(b)制備調(diào)控PCBP2表達(dá)或活性的調(diào)節(jié)劑；(c)制備調(diào)控細(xì)胞因子表達(dá)的試劑。

8.一種核酸芯片，其特征在于，所述的核酸芯片包括：

固相載體；以及

有序固定在所述固相載體上的寡核苷酸探針，所述的寡核苷酸探針特異性捕獲權(quán)利要求1所述的miRNA。

9.一種試劑盒，所述的試劑盒中含有權(quán)利要求8所述的miRNA芯片或權(quán)利要求1所述的miRNA。

10.一種特異性抑制或阻斷權(quán)利要求1所述的miRNA的抑制劑；以及所述的miRNA的抑制劑的用途，其特征在于，用于制備(a)治療禽流感的藥物，(b)緩解禽流感癥狀的藥物，(c)減少宿主動(dòng)物中禽流感病毒數(shù)量的藥物，(d)降低禽流感死亡率的藥物，(e)降低過(guò)度免疫的藥物。

11.一種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包括藥學(xué)上可接受的載體和特異性抑制或阻斷權(quán)利要求1所述的miRNA的抑制劑。

12.一種篩選用于治療禽流感的候選藥物的方法，其特征在于，包括步驟：

(a)提供一測(cè)試組和一對(duì)照組，其中在所述測(cè)試組中將候選物質(zhì)施用于測(cè)試組的細(xì)胞或動(dòng)物，并測(cè)定施用后所述測(cè)試組中miR-HA-3p的表達(dá)水平，而所述的對(duì)照組采用與測(cè)試組相同的條件，但不將候選物質(zhì)施用于對(duì)照組的細(xì)胞或動(dòng)物；

(b)將測(cè)試組的miR-HA-3p與對(duì)照組的miR-HA-3p的表達(dá)水平進(jìn)行比較；

其中，當(dāng)測(cè)試組的miR-HA-3p的表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組的miR-HA-3p的表達(dá)水平時(shí)，則表明該候選物質(zhì)是用于治療禽流感的候選藥物。