[發(fā)明專利]茶多糖衍生物及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310662617.5
• 申請(qǐng)日: 2013-12-10
• 公開（公告）號(hào): CN103613681A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊立群;伍淑韻;梁玄;鄒珊珊;潘靖雯;吳燕琳;張黎明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)
• 主分類號(hào): C08B37/00
• 分類號(hào): C08B37/00;A61K48/00;A61P3/10
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛(wèi)

技術(shù)領(lǐng)域

?本發(fā)明屬于天然多糖化學(xué)改性領(lǐng)域，具體涉及一種茶多糖衍生物及其制備方法。

背景技術(shù)

多糖來源于自然界，不僅安全無毒，而且具有很好的生物相容性和降解性。通過化學(xué)反應(yīng)，可合成出一些含胺類基團(tuán)的多糖衍生物（如殼聚糖衍生物）作為基因載體，它們能高效安全地將基因?qū)爰?xì)胞，起到治療疾病的作用（Lu?B.,?et?al.?Journal?of?Controlled?Release?2009.?137,?54–62）。

大量研究表明，茶多糖具有明顯的降血糖等生物活性（汪東風(fēng)等，中草藥，1995,?26(5),?255-257；徐仲溪等，茶葉科學(xué).?2004,?24(2),?75-81；傅海平等，茶葉通訊.?2006,?33(2),?24-28）。發(fā)明人曾經(jīng)從粗老茶中分離提取具有降血糖活性的茶多糖（Yang?L.?et?al.?Biomacromolecules?2010,?11,?3395-3405），經(jīng)研究證實(shí)，該茶多糖與上述文獻(xiàn)報(bào)道的茶多糖結(jié)構(gòu)相似，是一種含有阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、半乳糖醛酸、鼠李糖、核糖、木糖和甘露糖等糖單元的酸性雜多糖，它以(1→4)和(1→3)糖苷鍵連接的半乳糖和阿拉伯糖為主鏈，端基主要為葡萄糖單元，其它糖單元主要存在于支鏈中，茶多糖的重均分子量約為10⁵?–?10⁶?g/mol。然而，目前文獻(xiàn)中尚未見到有關(guān)制備茶多糖衍生物及其制備方法的報(bào)道。

最近研究發(fā)現(xiàn)（Samson?S.?L.,?et?al.?TRENDS?in?Endocrinology?and?Metabolism?2006,?17,?92–100），通過基因轉(zhuǎn)染技術(shù)可以誘導(dǎo)肝細(xì)胞產(chǎn)生胰島素并調(diào)節(jié)胰島素的釋放，從而降低血糖。因此，基因治療法正逐漸成為一種治療糖尿病的新方法，其技術(shù)關(guān)鍵是通過基因載體，將外源基因高效地導(dǎo)入細(xì)胞。上述茶多糖結(jié)構(gòu)報(bào)道的文獻(xiàn)顯示，茶多糖含有半乳糖基團(tuán)肝細(xì)胞靶向因子，它能被肝細(xì)胞膜上ASGPR（Asialoglycoprotein?receptor,?去唾液酸糖蛋白受體白）受體識(shí)別（Wu?D,?et?al.?Biomaterials?2009,?30,?1363–1371）。所以，如果能通過化學(xué)反應(yīng)，制備出含叔胺基團(tuán)的茶多糖衍生物作為一種基因載體，用于在肝細(xì)胞轉(zhuǎn)染胰島素基因，將有利于進(jìn)一步提高降血糖性能。

目前對(duì)于天然多糖的叔胺陽離子化改性，盡管文獻(xiàn)中已有通過N,N'-羰基二咪唑（CDI）活化法合成出含叔胺基團(tuán)的支鏈淀粉和糖原衍生物的報(bào)道，但是，由于多糖來源于自然界，各種多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)（包括糖單元結(jié)構(gòu)、糖苷鍵結(jié)構(gòu)、糖鏈的序列組成、支化結(jié)構(gòu)等）、分子量、物理化學(xué)性質(zhì)以及生物活性相差甚遠(yuǎn)，使得該合成法在實(shí)際應(yīng)用過程中也存在較大差別。

支鏈淀粉和糖原的化學(xué)結(jié)構(gòu)較為類似，均為葡萄糖單元通過α-(1→4)和α-(1→6)糖苷鍵連接的超支化多糖，支鏈淀粉和糖原的重均分子量分別為10⁶?–?10⁸?g/mol和10⁶???10⁷?g/mol，它們不具備特殊的生物活性。然而，茶多糖與支鏈淀粉和糖原相比，不僅化學(xué)結(jié)構(gòu)復(fù)雜、分子量小，而且還具有特殊的降血糖活性，熱穩(wěn)定性較差，對(duì)酸堿敏感（過酸或偏堿的環(huán)境均會(huì)使茶多糖發(fā)生降解）；此外，由于茶多糖含有羧酸基團(tuán)，導(dǎo)致其不能溶于絕大部分有機(jī)溶劑。因此，不能像支鏈淀粉和糖原那樣直接在有機(jī)溶劑中通過CDI法偶聯(lián)叔胺基團(tuán)。由此看來，如何實(shí)現(xiàn)既能保持茶多糖的生物活性又能對(duì)其進(jìn)行化學(xué)改性用作基因轉(zhuǎn)染載體，是一個(gè)較大的難題。在現(xiàn)有技術(shù)中，尚未見有相關(guān)含有叔胺基團(tuán)的茶多糖衍生物制備方法的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種含有叔胺基團(tuán)的茶多糖衍生物的制備方法。本發(fā)明的制備方法能在避免茶多糖降解的前提下偶聯(lián)叔胺基團(tuán)，制備得到含有叔胺基團(tuán)的茶多糖衍生物。

本發(fā)明的上述目的通過如下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：一種含有叔胺基團(tuán)的茶多糖衍生物的制備方法，具體包括如下步驟：

S1.?稱取0.1～1克茶多糖，置于10～100毫升pH4~7的緩沖溶液中，于室溫溶解；

S2.?稱取0.5～5克1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽（EDC），置于1～10毫升pH4~7的緩沖溶液中，于室溫?cái)嚢?～30分鐘溶解；