[發(fā)明專利]重組蛋白IGF1-24及其應用有效

申請?zhí)枺?/td>	201310660921.6	申請日：	2013-12-09
公開（公告）號：	CN103694340A	公開（公告）日：	2014-04-02
發(fā)明（設計）人：	唐麗靈;易茜;馮建國;萬榮雪;曾慧;歐夢婷	申請（專利權）人：	重慶大學
主分類號：	C07K14/65	分類號：	C07K14/65;C12N15/16;C12N15/70;C12N1/21;A61K38/30;A61P9/04;A61P9/10;A61P25/00;A61P25/16;A61P19/08;A61P19/10;A61P21/00
代理公司：	北京同恒源知識產(chǎn)權代理有限公司 11275	代理人：	趙榮之
地址：	400044 ***	國省代碼：	重慶;85
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摘要：
搜索關鍵詞：	重組蛋白 igf1 24 及其應用
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【說明書】：

技術領域

本發(fā)明屬于基因工程技術領域，涉及一種重組蛋白及其制藥用途。

背景技術

胰島素樣生長因子-1（IGF-1）是胰島素家族的一種單鏈多肽類生長因子，其結構與胰島素有高度同源性，具有細胞分化、增殖功能和胰島素樣代謝作用。對IGF-1的研究發(fā)現(xiàn)其在生長障礙、糖尿病、骨質疏松癥、腎臟疾病、心血管疾病、腫瘤及中樞神經(jīng)系統(tǒng)等方面都起到重要作用。

力生長因子（mechano?growth?factor,MGF）是IGF-1的一種剪接異構體。肌肉在受到機械刺激后，IGF-1基因會選擇性剪接產(chǎn)生MGF，通過激活肌肉衛(wèi)星細胞和合成代謝途徑來修復局部肌肉損傷。MGF之所以具有不同于IGF-1其他異構體的功能，部分是由于MGF?C末端的24個氨基酸（MGF-24），又稱為MGF?E肽，其被證明具有激活人類肌肉衛(wèi)星細胞、促進肌元細胞增殖等功能，但確切的分子作用機制目前尚不清楚。

發(fā)明內容

有鑒于此，本發(fā)明的目的之一在于對IGF-1和MGF-24進行結構改造，以期獲得一種具有更強活性的重組蛋白；目的之二在于提供該重組蛋白在制藥領域中的應用。

為達到上述目的，經(jīng)研究，本發(fā)明提供如下技術方案：

1.重組蛋白IGF1-24，氨基酸序列如SEQ?ID?No.2所示。

2.編碼所述重組蛋白IGF1-24的基因。

優(yōu)選的，所述基因的核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示。

3.含有重組蛋白IGF1-24編碼基因的重組表達載體。

4.含有IGF1-24基因重組表達載體的微生物轉化體。

5.重組蛋白IGF1-24在制備促進肌肉生長和損傷修復的藥物中的應用。

6.重組蛋白IGF1-24在制備促進骨生長和損傷修復的藥物中的應用。

7.重組蛋白IGF1-24在制備促進神經(jīng)細胞損傷修復的藥物中的應用。

8.重組蛋白IGF1-24在制備促進心肌修復的藥物中的應用。

本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明將IGF-1序列的C端與MGF-24序列的N端通過3個GLY連接子連接，構建了重組蛋白IGF1-24。研究結果顯示，該重組蛋白能夠促進成肌細胞的增殖、分化、粘附和遷移，能夠促進成骨細胞的增殖和遷移，能夠促進神經(jīng)細胞的損傷修復，還能夠促進心肌細胞的增殖，且作用明顯強于IGF-1和MGF-24，可制成藥物，用于治療肌肉、骨、神經(jīng)、心肌損傷等相關疾病，為改善患者生存質量發(fā)揮積極、重要的推動作用。

附圖說明

為了使本發(fā)明的目的、技術方案和有益效果更加清楚，本發(fā)明提供如下附圖進行說明：

圖1為重組蛋白IGF1-24誘導表達產(chǎn)物和純化產(chǎn)物的SDS-PAGE結果，其中1為轉染pGEX-4T-1/IGF1-24大腸桿菌的誘導表達產(chǎn)物，2為純化蛋白。

圖2為重組蛋白IGF1-24促進成肌細胞C2C12增殖。

圖3為重組蛋白IGF1-24促進成肌細胞C2C12分化標記蛋白Myogenin的表達。

圖4為重組蛋白IGF1-24促進成肌細胞C2C12融合。

圖5為重組蛋白IGF1-24促進成肌細胞C2C12粘附。

圖6為重組蛋白IGF1-24促進成肌細胞C2C12遷移。

圖7為重組蛋白IGF1-24對C2C12細胞增殖的影響依賴于IGF-1受體。

圖8為重組蛋白IGF1-24對C2C12細胞粘附的影響不依賴于IGF-1受體。

圖9為重組蛋白IGF1-24對C2C12細胞遷移的影響不依賴于IGF-1受體。

圖10為重組蛋白IGF1-24促進大鼠成骨細胞增殖。