[發明專利]一種天然抗菌肽及其應用

在審

• 申請號: 201310660578.5
• 申請日: 2015-08-03
• 公開（公告）號: CN104497119A
• 公開（公告）日: 2015-07-29
• 發明（設計）人: 王義鵬
• 申請（專利權）人: 王義鵬
• 主分類號: C07K14/46
• 分類號: C07K14/46;C12N15/12;A61K38/17;A61K8/64;A61P31/10;A61P31/04;A23K1/17;A01N47/44;A01P1/00;A01P3/00
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

技術領域

本發明屬于生物醫學技術領域，具體的說是一種天然抗菌肽QHA及其應用。

背景技術

近年來傳統抗生素的大規模濫用導致越來越嚴重的病原微生物耐藥問題，給人類健康帶來巨大的威脅。臨床上應對耐藥微生物感染的措施是使用對耐藥微生物尚未使用過的新的或者替代性的抗生素，因此這就需要持續開發新的抗微生物藥物。

抗菌肽是生物體基因編碼的一種天然小分子多肽，是生物體免疫系統的一種重要分子，對細菌、真菌、病毒甚至原蟲均具有直接的殺滅作用。抗菌肽具有分子量小、結構簡單、抗菌活性強、殺菌機制獨特、毒性低和不易引起耐藥性等優點，因此自發現之日起就被認為是具有極大開發潛力的新一代抗生素。到目前為止，已從不同生物體中發現超過1500多種不同的抗菌肽，而且其數目還在增加。

發明內容

本發明的目的在于提供一種天然抗菌肽QHA及其基因和應用。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種天然抗菌肽QHA，天然抗菌肽QHA由30個氨基酸殘基組成，為直鏈多肽，分子量3628.5Da，等電點12.61，其氨基酸序列由SEQ?ID?NO.1所示。

所述編碼天然抗菌肽QHA的前體的基因自5’端至3’端的堿基序列由SEQ?ID?NO.2所示。

所述SEQ?ID?NO.2所示堿基序列可應用于多肽重組表達，轉基因動物、植物、植物部分、動物細胞或植物細胞中。

一種天然抗菌肽QHA的應用，所述天然抗菌肽QHA可制備抗菌藥物、抑制細菌生長藥物、防腐劑、動物飼料或化妝品前體。

所述天然抗菌肽QHA可用于制備抗革蘭氏陽性細菌、革蘭氏陰性細菌或真菌的藥物或組合物。

本發明所具有的優點：

本發明所述天然抗菌肽QHA具有分子量小、化學合成方法簡單、抗菌作用廣譜高效、穩定性好等有益特點，具有廣泛的應用前景。

具體實施方式

下面用實施例來進一步說明本發明的實質性內容，但本發明的內容并不局限于此。

實施例1

天然抗菌肽QHA編碼基因的克隆：

1）青環海蛇毒腺總RNA提取：

①取250mg青環海蛇毒腺組織，放入研缽中加入液氮研磨成粉末，轉移到EP管中，加入1m1總RNA提取試劑(Trizol，美國Invitrogen公司產品)，充分混勻，而后于4℃，12000rpm離心10min。

②離心取上清，加入0.2ml氯仿溶液，劇烈混勻，室溫放置10分鐘，而后以4℃，12000rpm離心10分鐘，棄除沉淀。

③上清加入等體積的異丙醇，室溫放置10分鐘，以4℃，12000rpm離心10分鐘，收集沉淀用75%（V/V）乙醇洗一次，晾干，管底沉淀物即為青環海蛇毒腺總RNA。

2）青環海蛇毒腺cDNA文庫構建：采用CLONTECH公司In-Fusion?SMARTer?^TM?Directional?cDNA?Library?Construction?Kit構建。

（1）cDNA第一鏈合成(mRNA反轉錄)：

①經DEPC處理（DEPC處理是在含0.1%（V/V）DEPC的水浸泡過夜，高壓滅菌，烘干）的離心管中加入1μl青環海蛇毒腺總RNA、1μl3’端一鏈合成引物（3’In-Fusion?SMARTer?CDS?Primer）和2.5μl經DEPC處理（DEPC處理是將含0.1%（V/V）DEPC的水，放置過夜，高壓滅菌）的水使總體積達到4.5μl，混勻后短暫離心（2000rpm，30s），離心后于72℃保溫3分鐘；保溫后再將離心管在42℃孵育2分鐘。