[發明專利]一種分離提取糜蛋白酶的方法

無效

• 申請號: 201310659581.5
• 申請日: 2013-12-02
• 公開（公告）號: CN103695404A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發明（設計）人: 劉乃山;李靜潔;劉君;劉振海;劉翠珍
• 申請（專利權）人: 青島康原藥業有限公司
• 主分類號: C12N9/76
• 分類號: C12N9/76
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種分離提取糜蛋白酶的方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)結晶；(2)活化；(3)鹽析；(4)透析；(5)凍干。

2.權利要求1所述制備方法，其特征在于，各步驟具體為：

(1)結晶工序

糜蛋白酶粗品加水溶解，調pH值至2.5～3.5，靜置8～12小時；

結晶：將糜蛋白酶粗品溶解液再調pH值至2.0～3.0；加入飽和硫酸銨溶液，調pH值至4.0～6.0，置25±3℃條件下，保溫20～48小時，過濾，收集濾餅；

濾餅加水溶解，重復上述結晶操作3次，收集濾餅；

(2)活化工序

用水溶解上步中所得濾餅，調pH值至7.0～9.0；

加磷酸鹽緩沖液，調pH值至7.0～9.0；加入活化劑，活化60～80小時；

(3)鹽析工序

活化液調pH值至3.0～5.0，加入固體硫酸銨進行鹽析，過濾，收集濾餅；

(4)透析工序

濾餅加水溶解，放透析袋，透析4～6天。

(5)凍干工序

收集、合并透析液，過濾，調節pH值至5.5～6.7，裝盤、凍干。

3.根據權利要求2所述的一種分離提取糜蛋白酶的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，飽和硫酸銨溶液與粗品溶液的體積比為1～3。

4.根據權利要求2所述的一種分離提取糜蛋白酶的方法，其特征在于，所述步驟(2)中加入活化劑的比例為3～8mg/100ml料液，活化60～80小時。

5.根據權利要求4所述的一種分離提取糜蛋白酶的方法，其特征在于，所述活化劑為胰蛋白酶。

6.根據權利要求2所述的一種分離提取糜蛋白酶的方法，其特征在于，所述步驟(3)中活化液按400～600g/L的比例加入固體硫酸銨進行鹽析。

7.根據權利要求2所述的一種分離提取糜蛋白酶的方法，其特征在于，所述步驟(4)中，濾餅加水溶解的比例為1～1.5ml/g。

8.根據權利要求2所述的一種分離提取糜蛋白酶的方法，其特征在于，所述步驟(5)中凍干前pH調節為6.0～6.5。

9.一種糜蛋白酶，其特征在于，所述糜蛋白酶通過權利要求1-8任意之一的方法制備得到，其效價為1200～1500單位/毫克。