[發明專利]金吉麗海棠組織培養快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201310659036.6
• 申請日: 2013-12-09
• 公開（公告）號: CN103636501A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發明（設計）人: 李長林;楊守坤;金莉;宿福園;姚延興;劉先葆;裴忺
• 申請（專利權）人: 武漢市林業果樹科學研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 馬輝

1.一種金吉麗海棠組織培養快速繁殖方法，其特征在于：包括以下步驟：

1）外植體選擇與清洗：4-5月間從金吉麗海棠的母株的健壯枝條上采集含有腋芽的當年生枝條，用肥皂水浸泡5～15min，流水沖洗30～90min后備用；

2）外植體消毒：在超凈工作臺上先用體積分數為65～75%的酒精將清洗干凈的外植體消毒30～60s，無菌水沖洗3～5次，每次2～4min；再用0.2～0.3%升汞消毒5～10min，無菌水沖洗3～5次，每次2～4min；

3）初代培養：在超凈工作臺上將消毒處理好的外植體切成含有腋芽且長度為2～4cm的莖段，并將莖段接入芽誘導培養基中，培養溫度為25±1，℃光照時間為10～20h，光強1800～2200Lx；其中，所述的芽誘導培養基的配方為：MS培養基中+0.5～1.2mg·L^-16-BA+0.05～0.3mg·L^-1NAA+1～5%蔗糖+0.2～1.0%瓊脂，pH5.2～5.5；

4）繼代培養：在初代培養基中培養20～25d，腋芽萌發生長出叢生芽，并進一步生長成幼嫩植株的上半部分，將1.0～3.0cm左右的叢芽采取芽間分離的方式分成單獨的嫩枝，轉接入增殖培養基，其中，所述的增殖培養基的配方為：MS培養基中+1.5～3.0mg·L^-16-BA+0.0.5～0.2mg·L^-1NAA+2～6%蔗糖+0.2～1.0%瓊脂，pH5.2～5.5；

5）生根培養：在增殖培養基中培養22～28d，基部再生出叢芽，將長度超過2.5cm的嫩枝從芽叢上分離，接入生根培養基，培養50d后，形成健壯的生根苗；其中，所述的生根培養基的配方為：MS培養基中+0.1～0.3mg·L^-1IBA+2～6%蔗糖+0.2～1.0%瓊脂，pH5.2～5.5。

2.根據權利要求1所述的金吉麗海棠組織培養快速繁殖方法，其特征在于：包括以下步驟：

1）外植體選擇與清洗：4～5月間從金吉麗海棠的母株的健壯枝條上采集含有腋芽的當年生枝條，先用肥皂水浸泡10min，流水沖洗60min后備用；

2）外植體消毒：在超凈工作臺上先用70%的酒精將清洗干凈的外植體消毒30s，無菌水沖洗4次，每次2min；再用0.2%升汞消毒8min，無菌水沖洗5次，每次2min；

3）初代培養：在超凈工作臺上將消毒處理好的外植體切成含有1個腋芽且長度為2cm的莖段，并將莖段接入芽誘導培養基中，培養溫度為25±1，℃光照時間為15h，光強1800～2200Lx，其中，所述的芽誘導培養基的配方為：MS培養基中+1.0mg·L^-16-BA+0.2mg·L^-1NAA+3%蔗糖+0.54%瓊脂，pH5.2～5.5；

4）繼代培養：在初代培養基中培養20～25d，腋芽萌發生長出叢生芽，并進一步生長成幼嫩植株的上半部分，將1.5cm的叢芽采取芽間分離的方式分成單獨的嫩枝，轉接入增殖培養基，其中，所述的增殖培養基的配方為：MS培養基中+2.0mg·L^-16-BA+0.1mg·L^-1NAA+3%蔗糖+0.54%瓊脂，pH5.2～5.5；

5）生根培養：在增殖培養基中培養22～28d，基部再生出叢芽，將長度超過2.5cm的嫩枝從芽叢上分離，接入生根培養基，培養50d后，形成健壯的生根苗，其中，所述的生根培養基的配方為：MS培養基中+0.2mg·L^-1IBA+3%蔗糖+0.54%瓊脂，pH5.2～5.5。