[發明專利]感受胞內pH變化的Smad5蛋白及其應用

有效

• 申請號: 201310655201.0
• 申請日: 2013-12-05
• 公開（公告）號: CN104693308B
• 公開（公告）日: 2020-08-04
• 發明（設計）人: 章小清;劉玲;房玉江
• 申請（專利權）人: 同濟大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;C12P21/02;C12Q1/02
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 祝蓮君;雷芳

1.一種Smad5蛋白或其編碼序列的用途，其特征在于，用于構建具有核漿穿梭功能的重組蛋白，其中所述的核漿穿梭包括出核和入核；

并且，所述的重組蛋白具有選自下組的一種或多種功能：

(a)所述重組蛋白的核漿穿梭受溫度調控，其中包括：可感受低溫，并在低溫下導致促進重組蛋白的出核；感受高溫，并在高溫下導致促進重組蛋白的入核；

其中，所述低溫是指低于32.5℃的溫度，所述高溫是指高于37℃的溫度；

(b)所述重組蛋白的核漿穿梭受胞外pH調控，其中包括：可感受胞外pH升高情況，當pH高于7.48時，導致促進重組蛋白的出核；感受胞外pH降低情況，當pH低于6.62時，導致促進重組蛋白的入核；

(c)所述重組蛋白的核漿穿梭受胞內pH調控，其中包括：可感受胞內pH升高情況，當pH高于7.48時，導致促進重組蛋白的出核；感受胞內pH降低情況，當pH低于6.62時，導致促進重組蛋白的入核；

(d)所述重組蛋白的核漿穿梭受胞外滲透壓的調控，其中包括：可感受胞外滲透壓升高情況，當滲透壓高于350mOSM/kg時，導致促進重組蛋白的出核；感受胞外滲透壓降低情況，當滲透壓低于250mOSM/kg時，導致促進重組蛋白的入核。

2.一種Smad5的MH1結構域或其編碼序列的用途，其特征在于，用于構建感受溫度變化、胞外pH變化、胞內pH變化以及胞外滲透壓變化的重組蛋白。

3.如權利要求2所述的用途，其特征在于，所述的Smad5的MH1結構域的氨基酸序列如SEQ ID NO:2中第1-133位所示。

4.一種重組蛋白，其特征在于，所述的重組蛋白含有(a)外源的、溫度/胞內外pH/滲透壓感受元件，即核漿穿梭信號感受元件，以及(b)與所述元件(a)操作性相連的氨基酸序列，

其中，所述的溫度/胞內外pH/滲透壓感受元件是來源于Smad5的MH1結構域；

并且所述的重組蛋白不是Smad5蛋白。

5.如權利要求4所述的重組蛋白，其特征在于，所述的Smad5的MH1結構域的氨基酸序列如SEQ ID NO:2中第1-133位所示。

6.一種核酸序列，其特征在于，所述核酸序列編碼權利要求4所述的重組蛋白。

7.一種載體，其特征在于，所述的載體含有權利要求6所述的核酸序列。

8.一種重組細胞，其特征在于，所述的重組細胞含有權利要求7所述的載體或基因組中整合有權利要求6所述的核酸序列。

9.一種產生權利要求4所述的重組蛋白的方法，其特征在于，包括步驟：

(i)培養權利要求8所述的重組細胞，從而表達權利要求4所述的重組蛋白；和

(ii)分離或純化所述的重組蛋白。