[發明專利]乙型肝炎核心抗體測定試劑盒以及檢測方法

無效

• 申請號: 201310654412.2
• 申請日: 2013-12-06
• 公開（公告）號: CN103616511A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發明（設計）人: 陳秀發;胡慶鋒;常立峻;徐海偉;李勇
• 申請（專利權）人: 蘇州長光華醫生物醫學工程有限公司
• 主分類號: G01N33/576
• 分類號: G01N33/576;G01N21/76
• 代理公司: 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224
• 代理人: 董建林

技術領域

本發明涉及乙型肝炎診斷試劑盒，具有設計基于競爭抑制法化學發光原理的乙型肝炎核心抗體測定試劑盒及檢測方法。

背景技術

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）感染引起的一種傳染性疾病。HBV可以通過血液和體液直接傳播，常見的傳播方式包括輸血、注射、傷口接觸、母嬰傳播等；常見的臨床癥狀有不適、發熱、黃疸、無癥狀肝炎、暴發性肝炎以及慢性肝炎等，慢性感染易發展成為肝癌，因此，檢測乙型肝炎的工作至關重要。

目前，常用的檢測方法是免疫學檢測，免疫學檢測時基于抗原和抗體的特異性反應進行檢測的一種手段，其可以利用同位素、酶、化學發光物質等對被檢測信號進行放大和顯示，因此常被用于檢測蛋白質，激素等微量生物活性物質。免疫學檢測經理了放射免疫檢測、酶聯免疫檢測以及光生物學標記免疫檢測技術三個階段，使免疫學檢測向著敏感性、準確性以及操作簡捷性的方向發展。

化學發光免疫分析是近十年來在世界范圍內發展非常迅速的非放射性免疫分析技術。檢測原理是以發光物質作為信號放大系統并借助其發光強度直接測定免疫結合。該方法靈敏度高、檢測范圍寬，是免疫學檢測重要的發展方向。

發明內容

本發明解決了現有技術中的不足，提供一種靈敏度高、誤差小、安全快速檢測的乙型肝炎核心抗體測定試劑盒及檢測方法。

本發明的技術方案為：一種乙型肝炎核心抗體測定試劑盒，包括試劑M、試劑R1、試劑R2以及對照品，所述試劑M中組分包括親和素包被磁微粒，所述親和素包被磁微粒經診斷試劑防腐劑處理；所述試劑R1中的組分包括生物素化HBcAg、Tris緩沖液以及診斷試劑防腐劑；所述試劑R2中的組分包括吖啶酯標記的抗-HBc、Tris緩沖液以及診斷試劑防腐劑；所述對照組包括人源性乙肝核心抗體、新生牛血清以及診斷試劑防腐劑；所述生物素化HBcAg和吖啶酯標記的抗-HBc形成雙標記模式，所述雙標記模式在試劑盒的測定中的免疫過程中保持液相。

本發明的一個較佳實施例中，進一步包括，所述親和素包被磁微粒的親和素為鏈霉親和素、中性親和素或類親和素，所述親和素包被磁微粒中的磁微粒是以四氧化三鐵為內核表面包裹活性基團的聚合物，所述磁微粒的直徑為1.5um。

本發明的一個較佳實施例中，進一步包括，試劑R1和試劑R2中所述Tris緩沖液的濃度均為0.05M，pH值為7.5。

本發明的一個較佳實施例中，進一步包括，所述診斷試劑防腐劑為0.1%的Proclin300防腐劑。

本發明的一個較佳實施例中，進一步包括，所述試劑R1的量為12ml，所述試劑R2的量為12ml，所述試劑M的量為3ml。

本發明的一個較佳實施例中，進一步包括，所述對照品包括對照品1和對照品2兩組，所述對照品1的量為0.5ml，近似濃度為0.0IU/ml，所述對照品2的量為0.5ml，近似濃度為2.0IU/ml。

本發明的一個較佳實施例中，進一步包括，一種使用該乙型肝炎核心抗體測定試劑盒的檢測方法，包括以下幾步：

（1）在將待測樣品和含有生物素化的基因表達的核心抗原（HBcAg）的試劑R1進行反應，形成含有抗體-抗原復合體的反應液1；

（2）在反應液1中加入含有吖啶酯標記的Anti-HBc的試劑R2進行反應，由于待測樣品中Anti-HBc的結合抑制作用，形成生物素化HBcAg-吖啶酯標記抗體復合體的數量減少，得到反應液2；

（3）在反應液2中加入含有親和素包被磁微粒的試劑M，反應液2中的復合體在生物素和親和素的相互作用下形成固相，得到了反應液3；

（4）將反應液4置于化學發光測定儀上進行檢測，在磁場中磁微粒將被吸附，通過洗滌液洗滌，將未結合物沖洗除去；然后，注入化學發光激發液1及化學發光激發液2，檢測其化學發光光子強度；產生的光強度與樣本內Anti-HBc濃度成反比。

本發明的一個較佳實施例中，進一步包括，所述化學發光激發液1中含有過氧化氫，所述化學發光激發液2中含有氫氧化鈉，所述洗滌液含有磷酸鹽緩沖液。

本發明的解決了現有技術的缺陷，具有以下有益效果：