[發明專利]乙型肝炎病毒e抗原測定試劑盒以及檢測方法

無效

• 申請號: 201310653455.9
• 申請日: 2013-12-06
• 公開（公告）號: CN103616513A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發明（設計）人: 陳秀發;胡慶鋒;常立峻;徐海偉;李勇
• 申請（專利權）人: 蘇州長光華醫生物醫學工程有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224
• 代理人: 董建林

技術領域

本發明涉及乙型肝炎診斷試劑盒，具有設計基于雙抗體化學發光原理的乙型肝炎病毒e抗原測定試劑盒及檢測方法。

背景技術

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）感染引起的一種傳染性疾病。HBV可以通過血液和體液直接傳播，常見的傳播方式包括輸血、注射、傷口接觸、母嬰傳播等；常見的臨床癥狀有不適、發熱、黃疸、無癥狀肝炎、暴發性肝炎以及慢性肝炎等，慢性感染易發展成為肝癌，因此，檢測乙型肝炎的工作至關重要。

目前，常用的檢測方法是免疫學檢測，免疫學檢測時基于抗原和抗體的特異性反應進行檢測的一種手段，其可以利用同位素、酶、化學發光物質等對被檢測信號進行放大和顯示，因此常被用于檢測蛋白質，激素等微量生物活性物質。免疫學檢測經理了放射免疫檢測、酶聯免疫檢測以及光生物學標記免疫檢測技術三個階段，使免疫學檢測向著敏感性、準確性以及操作簡捷性的方向發展。

化學發光免疫分析是近十年來在世界范圍內發展非常迅速的非放射性免疫分析技術。檢測原理是以發光物質作為信號放大系統并借助其發光強度直接測定免疫結合。該方法靈敏度高、檢測范圍寬，是免疫學檢測重要的發展方向。

發明內容

本發明解決了現有技術中的不足，提供一種靈敏度高、誤差小、安全快速檢測的乙型肝炎病毒e抗原測定試劑盒及檢測方法。

本發明的技術方案為：一種乙型肝炎病毒e抗原測定試劑盒，其特征在于，包括試劑M、試劑R以及對照品，所述試劑M中組分包括經診斷試劑防腐劑處理的親和素包被磁微粒，所述親和素包被磁微粒為通用型磁微粒；所述試劑R中的組分包括生物素化抗-HBe抗體、吖啶酯標記的抗-HBe抗體、MES緩沖液以及診斷試劑防腐劑，所述吖啶酯標記的抗-HBe抗體是以吖啶酯通過二甲基亞胺偶聯抗-HBe抗體；所述對照組包括人源性乙肝e抗原、新生牛血清以及診斷試劑防腐劑。

本發明的一個較佳實施例中，進一步包括，所述親和素包被磁微粒中的親和素為鏈霉親和素、中性親和素或類親和素，所述親和素包被磁微粒中的磁微粒是以四氧化三鐵為內核表面包裹活性基團的聚合物。

本發明的一個較佳實施例中，進一步包括，所述抗-HBe抗體為鼠源單克隆抗-HBe抗體。

本發明的一個較佳實施例中，進一步包括，試劑R中所述MES緩沖液的濃度為0.05M，pH值為6.0。

本發明的一個較佳實施例中，進一步包括，所述診斷試劑防腐劑為0.1%的Proclin300防腐劑。

本發明的一個較佳實施例中，進一步包括，所述試劑R為23ml，所述試劑M的量為3ml。

本發明的一個較佳實施例中，進一步包括，所述對照品包括對照品1和對照品2兩組，所述對照品1的量為0.5ml，濃度為0.0PEIU/ml，所述對照品2的量為0.5ml，濃度為1.5PEIU/ml。

本發明的一個較佳實施例中，進一步包括，一種使用該乙型肝炎病毒e抗原測定試劑盒的檢測方法，包括以下幾步：

（1）在將待測樣品和含有生物素化的e抗體（Anti-HBe）及吖啶酯標記的Anti-HBe的試劑R進行反應，形成含有抗體-抗原-抗體夾心復合體的反應液1；

（2）在反應液1中加入含有親和素包被磁微粒的試劑M，反應液1中的復合體在生物素和親和素的相互作用下形成固相；

（3）將反應液1置于化學發光測定儀上進行檢測，在磁場的檢測中的磁微粒將被吸附，通過洗滌液洗滌，將未結合物沖洗除去；然后，注入化學發光激發液1及化學發光激發液2，檢測其化學發光光子強度；產生的光強度與樣本內乙型肝炎病毒e抗原濃度成正比。

本發明的一個較佳實施例中，進一步包括，所述化學發光激發液1中含有過氧化氫，所述化學發光激發液2中含有氫氧化鈉，所述洗滌液含有磷酸鹽緩沖液。

本發明的解決了現有技術的缺陷，具有以下有益效果：

1.本發明涉及的乙型肝炎病毒e抗原測定試劑盒，內含有親和素包被的磁微粒，利用了雙抗體化學發光原理（夾心法），在磁場中反應液中的磁微粒會被吸附，通過洗滌將未結合物沖洗除去，然后再注入化學發光激發液檢測化學發光光子強度，因為光強度與樣本中的乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）濃度成正比，所以很容易就得到樣本中的HBeAg濃度，從而可以輔助診斷急性和慢性HBV感染。