[發明專利]一種檢測精漿果糖試劑盒

無效

• 申請號: 201310653263.8
• 申請日: 2013-12-06
• 公開（公告）號: CN103667421A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 賴仕彬;黨英萍;陳友波
• 申請（專利權）人: 重慶博士泰生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/533
• 分類號: C12Q1/533;C12Q1/48;C12Q1/32;G01N21/33
• 代理公司: 云南派特律師事務所 53110
• 代理人: 龔筍根

技術領域

本發明涉及一種生物化學試劑盒，屬于醫用領域，具體地說是一種檢測精漿果糖試劑盒。

背景技術

近年來,隨著人們對優生優育的要求逐步提高,精液分析也成為臨床常用的評價男性生育功能的重要檢測手段,而男性副性腺功能對男性生殖功能的影響越來越受到人們的重視。精漿中的一些生化標志物可反映性腺功能,其中精漿果糖來自精囊液,由精囊腺分泌,是精子運動的能量來源。睪酮的水平影響精囊果糖的分泌，雄激素不足可造成果糖含量降低，因此果糖含量能間接反映睪丸間質細胞分泌睪酮的功能。

精漿果糖可作為精囊分泌功能的指標。精漿果糖測定可用于鑒別單純性輸精管阻塞所致的無精子癥和輸精管、精囊發育不良引起的無精子癥。精漿果糖測定對判斷男性生育力具有重要意義。研究發現，精漿果糖濃度減少的病例，精子存活率常較低，精子的活動力明顯減弱。果糖含量與精子濃度明顯相關，精子濃度越高，果糖分解率越高，故果糖含量隨精子濃度的增加而降低。

鑒于此，精漿果糖的檢測就顯得尤為重要。目前，我國部分男科實驗室展開了精漿果糖的檢測，傳統使用的方法有氣相層析法、吲哚法、間苯二酚法、酶法。以上檢測方法具體闡述如下：氣相層析法原理是利用精漿中果糖與其他各組分物理化學的差異,在流動相經過固定相時,由于各組分在兩相間的吸附、解析或其他親和力的不同,各組分的移動速度也不同,而使果糖能從其他組分得到分離,并使果糖濃縮和富集,據色譜圖的峰高或面積來計算其含量。氣相層析法具有精確度高,特異性好,對標本需求量少的特點,但由于此法對儀器設備的要求高,難于在臨床推廣,常將它作為測定果糖的參考方法。

WHO推薦的精漿果糖定量檢測方法為吲哚法，其原理為果糖與吲哚在強酸、加熱環境中生成有色復合物，該有色物質在470nm波長有最大吸收峰，其吸光度大小與果糖含量成正比。適用儀器為酶標儀相較全自動生化分析儀操作繁瑣，不利于推廣；反應特異性不夠理想；在濃鹽酸環境下反應，由于濃鹽酸易揮發，易造成反應重復性差，尤其是標本檢測量大時，由于操作時間的延長，這種現象更為明顯；生物安全性差，強酸易污染環境及易腐蝕儀器。

間苯二酚法測定精漿果糖的原理是利用果糖在酸性環境中與間苯二酚保溫,生成一種紫紅色復合物,據其顏色的深淺求出果糖含量。適用儀器為半自動生化分析儀，且操作過程要求水浴保溫較全自動生化分析儀操作繁瑣，不利于推廣；間苯二酚乙醇液在室溫下放置過久會影響顯色效果,不宜久貯,需新鮮配制；在濃鹽酸環境下反應，由于濃鹽酸易揮發，易造成反應重復性差，尤其是標本檢測量大時，由于操作時間的延長，這種現象更為明顯；生物安全性差，強酸易污染環境及易腐蝕儀器。

酶法測定精漿果糖的原理為己糖激酶分解果糖為果糖-6-磷酸，后者可變構為葡萄糖-6-磷酸，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶催化葡萄糖-6-磷酸和NAD⁺生成NADH,通過監測340nm波長處NADH的吸光度值，并消除標本中葡萄糖對結果的影響后，可檢測出標本中果糖的濃度。但該技術適用儀器為酶標儀較全自動生化分析儀操作繁瑣，不利于推廣；精漿樣本測定前需要去蛋白測定試劑為凍干粉，測定前需溶解，步驟繁瑣。

發明內容

本發明提出一種改進后的精漿果糖試劑盒，該試劑具有樣本無需去蛋白處理，且試劑為液體試劑，具有無需使用前溶解的優點，使得操作簡單、準確度高、重復性好、抗干擾能力強的優點。

為實現上述目的，本發明所述一種檢測精漿果糖試劑盒，所述試劑盒包括試劑A和試劑B,所述試劑A各組分及其濃度范圍：己糖激酶15KU/L、磷酸葡萄糖異構酶30KU/L、NADP⁺1.2mmol/L、緩沖液70mmol/L、防腐劑0.95g/L；上述各組分分別加入純化水混勻即可；試劑B各組分及其濃度范圍：葡萄糖-6-磷酸脫氫酶10-30KU/L、ATP15-30mmol/L、防腐劑0.95g/L；上述各組分分別加入純化水混勻即可。

所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液、三羥甲基氨基甲烷緩沖液、PIPES緩沖液、HEPES緩沖液、TAPS緩沖液、甘氨酸緩沖液或硼酸緩沖液中的一種。

所述緩沖液的pH值為6.1-7.5。

所述防腐劑為疊氮鈉、乙基汞硫代硫酸鈉、對羥基苯甲酸、對羥基苯甲酸乙酯或苯酚廣譜殺菌劑中的一種。

所述防腐劑的pH為7.0-9.0。