[發(fā)明專利]一種提高纖維素酶生產(chǎn)水平的發(fā)酵工藝

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310653126.4
• 申請日: 2013-12-04
• 公開（公告）號: CN103602648A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李晨;張東遠(yuǎn);馬立娟;赫榮琳;賈文娣;張粲;陳樹林
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12R1/885
• 代理公司: 北京遠(yuǎn)大卓悅知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11369
• 代理人: 史霞

1.一種提高纖維素酶生產(chǎn)水平的發(fā)酵工藝，其特征在于，包括獲取菌種以及將獲取的菌種接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵獲得纖維素酶，在纖維素酶發(fā)酵過程中，在發(fā)酵開始后的前36～48h為菌種的菌體快速生長期，在開始發(fā)酵后的36～48h直至發(fā)酵結(jié)束為菌種的菌體穩(wěn)定期，根據(jù)菌體快速生長期和菌體穩(wěn)定期生長狀況的不同對發(fā)酵條件按照發(fā)酵時間進(jìn)行分段調(diào)整：

在發(fā)酵開始后的前36～48h內(nèi)發(fā)酵體系溫度為27～29℃，之后發(fā)酵體系溫度調(diào)低為25～27℃，直至發(fā)酵結(jié)束；

在發(fā)酵開始后的前24～36h內(nèi)發(fā)酵體系中溶氧為40～70％，之后發(fā)酵體系中溶氧調(diào)低為20％～50％，直至發(fā)酵結(jié)束；

在發(fā)酵開始后的第18～48h和在發(fā)酵開始后的第72～132h兩個時間段內(nèi)向所述發(fā)酵體系內(nèi)緩慢添加葡萄糖溶液，所述葡萄糖溶液添加流速為8～16mL/min，所述葡萄糖溶液的濃度為200～400g/L。

2.如權(quán)利要求1所述的提高纖維素酶生產(chǎn)水平的發(fā)酵工藝，其特征在于，包括：

(1)獲取菌種：將所述菌種接種到種子培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)得種子培養(yǎng)液；

(2)將菌種的所述種子培養(yǎng)液按照體積比為1∶25～3∶50的比例接種到發(fā)酵罐的發(fā)酵培養(yǎng)基中制成發(fā)酵體系，以纖維素為底物開始纖維素酶發(fā)酵。

3.如權(quán)利要求2所述的提高纖維素酶生產(chǎn)水平的發(fā)酵工藝，其特征在于，在發(fā)酵開始后的前36～48h內(nèi)發(fā)酵體系溫度為28℃，之后發(fā)酵體系溫度調(diào)低為26℃，直至發(fā)酵結(jié)束。

4.如權(quán)利要求3所述的提高纖維素酶生產(chǎn)水平的發(fā)酵工藝，其特征在于，在發(fā)酵開始后的前24～36h內(nèi)發(fā)酵體系中溶氧為50％，之后發(fā)酵體系中溶氧調(diào)低為30％，直至發(fā)酵結(jié)束。

5.如權(quán)利要求4所述提高纖維素酶生產(chǎn)水平的發(fā)酵工藝，其特征在于，在纖維素酶發(fā)酵過程中的35～45h內(nèi)發(fā)酵體系pH值調(diào)高為4.8～5.2，之后發(fā)酵體系pH在35～45h到55～65h調(diào)低為4.3～4.7，之后，在纖維素酶發(fā)酵過程的第55～65h直至發(fā)酵結(jié)束再將發(fā)酵體系的pH調(diào)高為4.8～5.2。

6.如權(quán)利要求5所述提高纖維素酶生產(chǎn)水平的發(fā)酵工藝，其特征在于，在纖維素酶發(fā)酵過程中的35～45h內(nèi)發(fā)酵體系pH值為5.0，之后發(fā)酵體系pH在35～45h到55～65h調(diào)低為4.5，之后，在纖維素酶發(fā)酵過程的第55～65h直至發(fā)酵結(jié)束再將發(fā)酵體系的pH調(diào)高為5.0。

7.如權(quán)利要求6所述的提高纖維素酶生產(chǎn)水平的發(fā)酵工藝，其特征在于，在纖維素酶發(fā)酵開始后24～132h內(nèi)每隔6-12h添加纖維素一次，纖維素添加方法為：

(1)將纖維素與水混合成濃度為150～300g/L的纖維素和水的混合液；

(2)按所述混合液與發(fā)酵體系的體積比為1∶15～1∶50向所述發(fā)酵體系中添加所述混合液。

8.如權(quán)利要求7所述的提高纖維素酶生產(chǎn)水平的發(fā)酵工藝，其特征在于，所述纖維素為微晶纖維素。

9.如權(quán)利要求1～8中任一項所述的提高纖維素酶生產(chǎn)水平的發(fā)酵工藝，其特征在于，所述纖維素酶發(fā)酵開始后的90～100h之后，每隔10～14h抽樣檢測所述發(fā)酵體系的濾紙酶活一次，直至兩次抽樣檢測所述發(fā)酵體系的濾紙酶活不再增加時結(jié)束所述纖維素酶發(fā)酵過程。

10.如權(quán)利要求9所述的提高纖維素酶生產(chǎn)水平的發(fā)酵工藝，其特征在于，所述菌種為里氏木霉CCIC13052。