[發明專利]克隆禽α-干擾素的通用引物及其應用

有效

• 申請號: 201310652400.6
• 申請日: 2013-12-05
• 公開（公告）號: CN103789302A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 邢明偉;田荔;高明春;趙盼盼;劉世杰
• 申請（專利權）人: 東北林業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;費碧華

1.用于克隆禽類IFN-α基因的簡并引物，由一條上游簡并引物和一條下游簡并引物組成，其特征在于，所述的上游簡并引物的核苷酸序列為：5’-CASCRSYACRBCCASCASCTCSAGC-3’，所述的下游簡并引物的核苷酸序列為：5’-AGGMGGACGRGKTCCCASGCGCAG-3’，其中R=A/G，Y=C/T，M=A/C，K=G/T，S=C/G，B=C/G/T。

2.如權利要求1所述的用于克隆禽IFN-α基因的簡并引物，其特征在于，所述的禽類包括雞、鴨、鵝、孔雀以及丹頂鶴。

3.用于克隆禽類IFN-α基因的簡并引物，由一條上游簡并引物和一條下游簡并引物組成，其特征在于，所述的上游簡并引物的核苷酸序列為：5’-CYRSYSCTCNYGCTCCTYCT-3’，所述的下游簡并引物的核苷酸序列為：5’-AGGMGGACGRGKTCCCASGCGCAG-3’，其中R=A/G，Y=C/T，M=A/C，K=G/T，S=C/G，N=A/C/G/T。

4.如權利要求1所述的用于克隆禽IFN-α基因的簡并引物，其特征在于，所述的禽類包括雞、鴨、鵝、孔雀以及丹頂鶴。

5.一種用于克隆禽類IFN-α基因的方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）按照禽類血液基因組DNA的簡單快速提取方法，分別從家禽的血液中提取基因組DNA；

（2）分別以提取得到基因組DNA為模版，以權利要求1或權利要求3所述的簡并引物為引物，PCR擴增IFN-α基因；

（3）回收目的片段，將膠回收產物連入載體，轉化到感受態細胞中培養；

（3）挑取單克隆菌落，經菌液PCR鑒定陽性后進行測序；

（4）根據測序結果，通過常規的基因組步移的方法獲得禽類IFN-α的全長基因序列。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于當使用權利要求1所述的簡并引物為引物，PCR擴增IFN-α基因時，其反應條件為：94℃預變性8min；94℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，30個循環；72℃終延伸10min，4℃終止反應；當使用權利要求3所述的簡并引物為引物，PCR擴增IFN-α基因時，其反應條件為：94℃預變性8min；94℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，30個循環；72℃終延伸10min，4℃終止反應。

7.如權利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述的禽類包括雞、鴨、鵝、孔雀以及丹頂鶴。

8.權利要求1或2所述的用于克隆禽類IFN-α基因的簡并引物在禽類IFN-α基因克隆、鑒定和篩選中的應用。

9.權利要求3或4所述的用于克隆禽類IFN-α基因的簡并引物在禽類IFN-α基因克隆、鑒定和篩選中的應用。