[發明專利]一種來源于圓弧青霉的堿性脂肪酶

有效

• 申請號: 201310651601.4
• 申請日: 2013-12-05
• 公開（公告）號: CN103642769A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發明（設計）人: 李佩佩;齊建;王華明;黃亦鈞
• 申請（專利權）人: 青島蔚藍生物集團有限公司
• 主分類號: C12N9/20
• 分類號: C12N9/20;C12N15/55;C11D3/386
• 代理公司: 暫無信息
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技術領域

本發明屬于微生物工程技術領域，具體涉及一種來源于圓弧青霉的堿性脂肪酶及其應用。

背景技術

脂肪酶（Lipase），即三酰基甘油酰基水解酶，可以催化三酰甘油酯及其他一些水不溶性酯類的水解、醇解、酯化、轉酯化及酯類的逆向合成反應，除此之外還表現出其他一些酶的活性，如磷脂酶、溶血磷脂酶、膽固醇酯酶、酰肽水解酶活性等。脂肪酶不同活性的發揮依賴于反應體系的特點，如在油水界面促進酯水解，而在有機相中可以酶促合成和酯交換。脂肪酶的基本組成單位僅為氨基酸，通常只有一條多肽鏈，其催化活性僅僅決定于它的蛋白質結構。?

脂肪酶的性質研究主要包括最適溫度與pH、溫度與pH穩定性、底物特異性等幾個方面。迄今，已分離、純化了大量的微生物脂肪酶，并研究了其性質，它們在分子量、最適pH、最適溫度、pH和熱穩定性等方面存在不同。總體而言，微生物脂肪酶具有比動植物脂肪酶更廣的作用pH、作用溫度范圍、高穩定性和活性，對底物的特異性，因此對微生物脂肪酶的開發具有重要的意義。?

堿性脂肪酶是指在堿性條件下水解的脂肪酶，它能水解天然油脂，產生脂肪酸和甘油，是一種專門在異相系統油水接口上水解特殊酯類的酶。堿性脂肪酶是一種新型洗滌劑用酶，主要用途是作為洗滌劑的新酶種。它的特性是能分解衣物油污成甘油二酯、甘油單酯及脂肪酸等較易溶于水的物質，從而顯著提高洗滌劑的效果，尤其是去除黃斑的效果。此外，堿性脂肪酶還可應用于紡織、食品、纖維及造紙工業領域。因此，堿性脂肪酶具有更廣的應用價值，成為目前研究的熱點之一。?

發明內容

本發明的目的是提供一種新型堿性脂肪酶，并通過構建含有圓弧青霉（Penicillium?cyclopium）的脂肪酶基因的表達質粒，轉化入畢赤酵母中，從而獲得高效重組表達該堿性脂肪酶的畢赤酵母工程菌株，從而彌補現有技術的不足。?

本發明所述堿性脂肪酶，其特征在于：?

（a）其氨基酸序列為SEQ?ID?NO:1的脂肪酶；

（b）在（a）中的氨基酸上發生取代、缺失或添加一個或數個氨基酸得到的，具有脂肪酶活性的酶。

編碼上述堿性脂肪酶的基因，其一種編碼核苷酸序列為SEQ?ID?NO:?2。?

上述的堿性脂肪酶在洗滌劑中的應用。?

一種洗滌組合物，含有上述堿性脂肪酶。?

本發明提供的新型脂肪酶來源于圓弧青霉，本發明通過構建畢赤酵母工程菌高效表達該脂肪酶基因，搖瓶發酵酶活可達1630U/mL；本發明的重組堿性脂肪酶的最適作用pH為8.5，最適溫度為35℃。本發明所述的含有堿性脂肪酶的洗滌劑組合物去污力強，對國際污布EMPA116及EMPA117上的去污效果要好于競爭產品，且對環境的污染小，具有很高的推廣應用價值。?

附圖說明

圖1為畢赤酵母工程菌ALip發酵上清液SDS-PAGE電泳檢測分析圖，其中泳道1為畢赤酵母工程菌ALip發酵上清液，泳道2為對照組，箭頭所指處的條帶即為本發明的重組脂肪酶。?

具體實施方式

本發明用到了遺傳工程和分子生物學領域使用的常規技術和方法，例如MOLECULAR?CLONING:?A?LABORATORY?MANUAL,?3nd?Ed.?(Sambrook,?2001)和CURRENT?PROTOCOLS?IN?MOLECULAR?BIOLOGY?(Ausubel,?2003)中所記載的方法。這些一般性參考文獻提供了本領域技術人員已知的定義和方法。但是，這并不意味著將本發明限定于所述的任何具體方法、實驗方案和試劑，因為它們可以改變。?

除非在本文中另作限定，本文所用的全部技術術語和科學術語具有本發明所屬領域的普通計數人員通常所理解的相同含義。DICTIONARY?OF?MICROBIOLOGY?AND?MOLECULAR?BIOLOGY,?3nd?Ed.?(Singleton?et?al.,?2006)和COLLINS?DICTIONARY?BIOLOGY?(Hale?et?al.,?2003)為技術人員提供了本發明中所使用的許多術語的一般性解釋。?

????下面結合具體實施例對本發明進行詳細的描述。?

實施例1?堿性脂肪酶基因的克隆