[發明專利]一種轉Cry1Ab抗蟲基因水稻品系mfb-MH86的檢測方法

有效

• 申請號: 201310648656.X
• 申請日: 2013-12-06
• 公開（公告）號: CN103667475A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 蘇軍;顏靜宛;王鋒;胡太蛟;陳在杰;林智敏;李剛
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

技術領域

本發明屬于生物技術領域，特別是涉及一種轉Cry1Ab抗蟲基因水稻品系mfb-MH86的檢測方法及其所依賴的轉化體特異序列。

背景技術

水稻是我國乃至世界最主要的糧食作物之一。水稻也是蟲害發生較為嚴重的作物之一。我國水稻田間害蟲有600多種上，其中分布廣泛且為害較為嚴重的是二化螟、三化螟、稻縱卷葉螟等鱗翅目害蟲。據統計，每年我國由蟲害造成的損失占水稻總產量的5％以上，高達一千萬噸，每年用于水稻害蟲防治的費用都在135億元人民幣以上。而在水稻品種及野生稻中沒有抗鱗翅目害蟲的種質資源可以利用。以轉基因技術為核心的品種設計技術則可以將遠緣物種的抗性基因導入水稻中，從而使現有品種獲得高抗蟲特性。目前已經有多個轉基因水稻品系獲準進入環境釋放和生產性試驗。對轉基因作物的有效監管是轉基因作物安全利用的前提和保障。轉基因作物外源序列插入片段旁側序列是轉基因植物品系的最重要的分子身份證。因此，外源插入片段的旁側序列是建立轉基因作物品系特異性檢測方法的重要技術資料。

mfb-MH86是福建省農業科學院生物技術研究所和中國科學院遺傳與發育生物學研究所共同研發的抗二化螟、三化螟、稻縱卷葉螟以及大螟的具有廣泛應用前景的轉基因水稻品系。利用插入位點旁側序列特異性地鑒定轉基因品種（品系）是目前鑒定轉基因作物最可靠最特異的檢測方法，是準確鑒別區分同一轉化體及其衍生品系的方法。

利用插入位點旁側序列鑒定轉基因品系，該方法已在鑒定克螟稻、Bt汕優63、科豐6號和科豐8號品系中建立。mfb-MH86是最新研發的抗蟲轉基因水稻品系，尚無任何相關轉基因水稻mfb-MH86外源基因插入片段的旁側序列文章報道和專利。

發明內容

本發明的目的在于提供一種轉Cry1Ab抗蟲基因水稻品系mfb-MH86的檢測方法，利用插入位點旁側序列特異性地鑒定轉基因品種（品系），根據轉基因水稻品系mfb-MH86外源基因插入片段的旁側序列特征提供了該轉基因品系的特異性PCR檢測方法。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

所述方法是轉化體mfb-MH86中外源基因Cry1Ab表達框在水稻染色體上插入片段及其5’端旁側特異序列SEQ?ID?NO:1和3’?端旁側特異序列SEQ?ID?NO:2，以及基于這2段序列建立的特異性PCR擴增鑒定技術。

所述的5’端旁側特異序列為LB端旁側序列，其序列如SEQ?ID?NO:1所示；所述的3’端旁側特異序列為RB端旁側序列，其序列如SEQ?ID?NO:2所示。

依據LB端旁側序列設計的一對特異性引物為：

正向引物為B70-1F：5’-ATTGAAAGATGGGTGAAGGG-3’，

反向引物為Bb86-L3：5’-TCTTCATCTGAGCAAACATAAAC-3’。

所述的特異性引物：正向引物為依據SEQ?ID?NO:1中1-390位序列設計，反向引物依據SEQ?ID?NO:1中391-2000位序列設計。

依據RB端旁側序列設計的一對特異性引物為：

正向引物為Bb86-R4：5’-?TGTCTAACTACATCGTCTCTGCC-3’，

反向引物為B70-7R：5’-AAGACGAAGTTAGAAGACCA-3’。

所述的特異性引物：正向引物為依據SEQ?ID?NO:2中1-1300位序列設計，反向引物依據SEQ?ID?NO:2中1301-2000位序列設計。

一種轉基因水稻品系mfb-MH86外源基因插入片段的旁側序列，所述旁側序列為載體LB旁側序列及其插入水稻基因組中的一段序列，LB端旁側序列如SEQ?ID?NO:1所示，其中水稻基因組序列為1-390bp，載體LB序列為391-2000bp，該特異性序列為轉Cry1Ab基因水稻品系mfb-MH86所特有。

一種轉基因水稻品系mfb-MH86外源基因插入片段的旁側序列，所述旁側序列為載體RB旁側序列及其插入水稻基因組中的一段序列，RB端旁側序列如SEQ?ID?NO:2所示，其中水稻基因組序列為1-1300bp，載體RB序列為1301-2000bp，該特異性序列為轉Cry1Ab基因水稻品系mfb-MH86所特有。

PCR反應產物中含有SEQ?ID?NO:1序列或SEQ?ID?NO:2序列。