[發明專利]五價輪狀病毒疫苗抗原血清型的檢測方法

有效

• 申請號: 201310646174.0
• 申請日: 2013-12-04
• 公開（公告）號: CN103642940A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發明（設計）人: 宋菲菲;付作申;郝洪吉;張艷紅;陳旭;張曉雪
• 申請（專利權）人: 北京民海生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.用于RT-PCR檢測五價輪狀病毒疫苗抗原血清型的引物對，其特征在于，所述引物對選自引物對1～5中的至少一種：

引物對1：以輪狀病毒G1血清型VP7基因為靶基因的引物對

上游引物5′-CTGTAGCATTATTTGCTTTGAC-3′

下游引物5′-CATATCTAATTCAAGACTTTGG-3′；

引物對2：以輪狀病毒G2血清型VP7基因為靶基因的引物對

上游引物5′-TAACAGCACCATTTGTAAGG-3′

下游引物5′-ACAAACTTTTACCGTGCAGTC-3′；

引物對3：以輪狀病毒G3血清型VP7基因為靶基因的引物對

上游引物5′-AGTTATACTGTCACCACTCCTT-3′

下游引物5′-TTTCCAGTTGCAGTGTAGCG-3′；

引物對4：以輪狀病毒G4血清型VP7基因為靶基因的引物對

上游引物5′-ACTTAGATTCGTTTCTGGTGAG-3′

下游引物5′-TGCCAGTTTTTCGCTATCA-3′；

引物對5：以輪狀病毒G9血清型VP7基因為靶基因的引物對

上游引物5′-CTCCTTTTGCTTATCGTCATTG-3′

下游引物5′-TACCACTAAGTTTTCACTTGCG-3′。

2.根據權利要求1所述的引物對，其特征在于，所述引物對為引物對1～5。

3.含有權利要求1或2所述引物對的用于RT-PCR檢測五價輪狀病毒疫苗抗原血清型的試劑盒。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括dNTPs、RNA逆轉錄酶、RNase抑制劑、Taq?DNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反應緩沖液中的至少一種。

5.根據權利要求3或4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括標準陽性模板。

6.五價輪狀病毒疫苗抗原血清型的檢測方法，其特征在于，其是利用權利要求1或2所述引物對，或權利要求3-5任一項所述試劑盒對待測五價輪狀病毒疫苗抗原血清型進行RT-PCR檢測。

7.根據權利要6所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）提取樣品中的RNA；

2）以步驟1）中提取的RNA為模板，進行RT-PCR擴增反應；

3）分析擴增產物。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，RT-PCR反應體系以50μL計為：

9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，RT-PCR反應程序為：50℃反轉錄15min；94℃預變性2min；94℃變性5s，60℃退火30s，72℃延伸40s，共30個循環。