[發明專利]化合物Chaetomugilide A及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 201310646143.5
• 申請日: 2013-12-06
• 公開（公告）號: CN103694247A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發明（設計）人: 秦建春;張雅梅;田野;李想;王大成;邱大任;梁煒薇
• 申請（專利權）人: 秦建春
• 主分類號: C07D491/048
• 分類號: C07D491/048;C12P17/18;A61P31/04;C12R1/645
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技術領域

利用銀杏內生球毛殼菌0510-TY1發酵液分離制備Chaetomugilide?A，能夠用于抗大腸桿菌藥物的制備。

背景技術

植物內生真菌（Endophytic?fungi）是指生活史的一定階段或全部階段在健康植物的各種組織或器官內部的真菌。自從1993年，美國蒙大拿州立大學的Strobel小組在短葉紅豆杉（Taxus?brevifolia）內生真菌Taxomyces?andreanae中發現抗癌藥物紫杉醇，并應用于開發，國內外掀起藥用植物內生真菌的研究熱潮，很多新穎結構的成分被發現。近年來，從內生真菌中尋找和發現新的具有抗菌、抗腫瘤、抗病毒、提高免疫力、抗炎等活性化合物已成為開發新型藥物的重要途徑。

球毛殼菌（Chaetomium?globosum）屬于子囊菌門(Ascomycota)，糞殼菌綱（Sordariomycetes），糞殼菌目（Sordariales），毛殼菌科（Chaetomiaceae），毛殼菌屬(Chaetomiumsp.)。球毛殼菌不但分布廣泛，而且已被認為是各種結構多樣性次生代謝產物的豐富來源。現在已經發現了大量結構不同的新的具有生物活性的次生代謝產物，如球毛殼素類化合物，azaphilones，蒽醌，色酮，萜類化合物，甾體化合物。其中有許多化合物都具有顯著的生物活性，如抗腫瘤、抗炎、細胞毒性、酶抑制活性、抗菌活性等。

發明內容

本發明的目的在于從銀杏內生球毛殼菌0510-TY1發酵液中分離制備結構新穎的azaphilones類生物堿Chaetomugilide?A，并進行抗大腸桿菌的應用。

為實現上述任務，本發明采用如下技術方案：

1.?化合物Chaetomugilide?A，其結構式為：

。

2.?權利要求1所述的化合物在制備大腸桿菌藥物中的應用。

3.?權利要求1所述化合物的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

步驟（1）首先將球毛殼菌株0510-TYI在PDA培養基上活化5d，然后接種在種子PD液體培養基，180?rpm、28℃大型恒溫振蕩搖床培養5d，培養后的種子PD液體培養基按照體積比為10%的比例轉接入裝有燕麥液體培養基1.2L的2L三角瓶中，28℃靜置發酵培養60d；

步驟（2）過濾掉三角瓶液體發酵液中的菌絲體，得到紅色發酵濾液，發酵濾液緩慢流經大孔吸附樹脂D101柱，然后用蒸餾水沖洗分離柱至流出液為無色，隨后用50%的甲醇沖洗分離柱至流出液為基本無色，接著用70%的甲醇沖洗分離柱至流出液基本無色，收集70%的甲醇洗脫液，50℃減壓蒸餾除去甲醇，剩余水溶液用乙酸乙酯萃取三次，并將乙酸乙酯萃取液濃縮至干得到紅色浸膏；步驟（3）將紅色浸膏用適量甲醇溶解，通過凝膠Sephadex?LH-20柱層析，用甲醇洗脫，收集最下邊的紅色條帶洗脫液，并在50℃下將該部分洗脫液濃縮至20%體積，然后在30℃下利用旋轉蒸發儀進一步緩慢蒸發至10%體積，然后將其放在燒杯中靜置敞口揮發，揮發至1%體積時除去殘留液，并收集在燒杯中析出的紅色針狀晶體，即化合物Chaetomugilide?A。

?4.?根據權利要求3的制備方法，其特征在于，所述活化PDA培養基的組成為土豆200?g，葡萄糖20?g，瓊脂粉20?g和水?1000?mL；所述種子PD液體培養基的組成為土豆200?g，葡萄糖?20?g，水1000mL；所述的燕麥液體培養基的組成為燕麥片20?g，麥芽糖20?g，水1000mL。

首先對球毛殼菌0510-TY1進行發酵培養，然后對發酵液采用大孔吸附樹脂D101吸附和分極性洗脫，對目的化合物所在的極性段采用凝膠色譜結合重結晶方法分離純化得到目的化合物。采用核磁共振、質譜等輔助數據庫系統antibase確定化合物的結構。并通過體外抑菌實驗對化合物的抗大腸桿菌活性進行評價。?

具體實施方案

（1）菌株0510-TYI?首先在PDA培養基上活化5d，然后接種在種子PD液體培養基，180?rpm、28℃大型恒溫振蕩搖床培養5d，種子培養基按照10%的比例轉接入裝有燕麥液體培養基1.2L的2L三角瓶，28℃靜置發酵培養60d。