[發(fā)明專利]一種低溫狀態(tài)下快速啟動腐熟的秸稈腐熟劑及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310641595.4
• 申請日: 2013-12-03
• 公開（公告）號: CN103710282B
• 公開（公告）日: 2017-01-25
• 發(fā)明（設計）人: 杜秉海;林金新;董少英;姚良同;丁延芹
• 申請（專利權）人: 福州農(nóng)博士生物技術有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/18;C12N1/14;C05F11/08;C12R1/06;C12R1/125;C12R1/865;C12R1/685;C12R1/885
• 代理公司: 福州市博深專利事務所(普通合伙)35214
• 代理人: 林志崢

1.一種低溫狀態(tài)下快速啟動腐熟的秸稈腐熟劑，其特征在于，所述秸稈腐熟劑包括菌株YO-H，所述菌株YO-H保藏號為CGMCC?NO.4119。

2.根據(jù)權利要求1所述的低溫狀態(tài)下快速啟動腐熟的秸稈腐熟劑，其特征在于，所述秸稈腐熟劑還包括枯草芽孢桿菌、釀酒酵母菌、黑曲霉和哈茨木霉。

3.根據(jù)權利要求2所述的低溫狀態(tài)下快速啟動腐熟的秸稈腐熟劑，其特征在于，所述節(jié)桿菌、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母菌、黑曲霉、哈茨木霉的菌種數(shù)量比為1∶1∶1∶2∶2。

4.一種低溫狀態(tài)下快速啟動腐熟的秸稈腐熟劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

將菌株YO-H、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母菌、黑曲霉、哈茨木霉分別培養(yǎng)，培養(yǎng)至菌濃為10⁸/mL，按體積比1∶1∶1∶2∶2混合均勻得混合菌液，所得混合菌液以1:10的比例接種到麥麩中培養(yǎng)10天，所述麥麩中水分的質量分數(shù)為50%，置陰涼處風干至麥麩中水分的質量分數(shù)小等于25%，加入麥麩質量分數(shù)1%-1.5%的纖維素酶，混拌均勻即得到秸稈腐熟劑。

5.根據(jù)權利要求4所述的低溫狀態(tài)下快速啟動腐熟的秸稈腐熟劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）、將正在腐爛的玉米秸稈5℃富集培養(yǎng)，浸液稀釋后以纖維素為唯一碳源的雙層平板涂布5℃培養(yǎng)，直到形成單菌落，穿刺挑取菌落得到菌株YO-H；

（2）、將菌株YO-H、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母菌、黑曲霉、哈茨木霉分別培養(yǎng)，培養(yǎng)至菌濃為10⁸/mL，按體積比1∶1∶1∶2∶2混合均勻得混合菌液，所得混合菌液以1:10的比例接種到麥麩中培養(yǎng)10天，所述麥麩中水分的質量分數(shù)為50%，置陰涼處風干至麥麩中水分的質量分數(shù)小等于25%，加入麥麩質量分數(shù)1%-1.5%的纖維素酶，混拌均勻即得到秸稈腐熟劑。

6.根據(jù)權利要求4所述的低溫狀態(tài)下快速啟動腐熟的秸稈腐熟劑的制備方法，其特征在于，所述菌株YO-H的培養(yǎng)方法如下：

1）菌種活化：從斜面保藏管中取1環(huán)菌株YO-H的菌苔至30mL液體培養(yǎng)基中，37℃、200—250rpm培養(yǎng)20--24小時；

2）搖瓶培養(yǎng)：用無菌移液器汲取步驟1）得到的菌液于搖瓶中，接種量：1%；溫度：37℃；轉速：200—250rpm；培養(yǎng)時間：20-24h；

3）發(fā)酵罐培養(yǎng)：將步驟2）培養(yǎng)好的搖瓶接種到發(fā)酵罐擴大培養(yǎng)，接種方式：火焰接種；接種量：1%；溫度：37℃；轉速：180—200rpm；通氣量:1:0.8；罐壓：0.02MPa；時間：24—36h；得菌株YO-H菌液；

菌株活化及搖瓶用培養(yǎng)基制備方法如下：豆芽加去離子水煮沸20分鐘，所述豆芽的質量分數(shù)為25%，過濾除渣，補足體積，加入5%質量分數(shù)的葡萄糖溶解混勻，調整pH值至7.0，121℃滅菌30分鐘；

菌株斜面及平板計數(shù)用培養(yǎng)基制備方法如下：豆芽加去離子水煮沸20分鐘，所述豆芽的質量分數(shù)為25%，過濾除渣，補足體積，加入5%質量分數(shù)的葡萄糖、2%質量分數(shù)的瓊脂粉溶解混勻，調整pH值至7.0，121℃滅菌30分鐘。