[發明專利]豬PDLIM3蛋白三種亞型超表達載體的構建和應用

在審

• 申請號: 201310641331.9
• 申請日: 2013-12-04
• 公開（公告）號: CN104694545A
• 公開（公告）日: 2015-06-10
• 發明（設計）人: 王林杰;王薏琳;王艷
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/85
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

1.作為豬PDLIM3基因三種轉錄本，它們的核苷酸序列如序列表SEQ?ID?NO：1，SEQ?ID?NO：2和SEQ?ID?NO：3所述。

2.豬PDLIM3基因三種轉錄本真核重組質粒，其特征在于由序列表中SEQ?ID?NO：1，SEQ?ID?NO：2和SEQ?ID?NO：3所述的豬PDLIM3基因三種轉錄本的核苷酸序列和pEGFP-N1載體構建而成，其中利用帶有保護性堿基、末端分別帶有EcoR1和BamH1限制性內切酶酶切位點的引物進行PCR擴增，PCR反應的正、反向引物DNA序列如下所示：

正向引物（F1）：?5-?CGGAATTCATGCCCCAAAACGTGATC-3

反向引物（R1）：5-?CGGGATCCTGAGCTTTGGGATAGAGAGT-3。

3.制備如權利要求2所述的真核重組質粒的方法，按照以下步驟：

???（1）以豬肌肉的cDNA為模板，PCR擴增豬PDLIM3基因的三種轉錄本；

（2）用EcoR1和BamH1限制性內切酶分別對純化后的豬PDLIM3基因的三種轉錄本和pEGFP-N1質粒進行雙酶切，用連接酶T4?DNA?Ligase進行酶連接，然后將連接產物轉化大腸桿菌DH5α，涂布加有Kan抗生素的平板，篩選陽性克隆。

4.依據權利3所述方法獲得的豬PDLIM3基因三種轉錄本真核表達載體，在豬PDLIM3蛋白三種亞型亞細胞定位分布中的應用。