[發(fā)明專利]一種快速有效鑒定偃麥草屬Ee基因組的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310640042.7
• 申請日: 2013-12-03
• 公開（公告）號: CN103642916A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周永紅;沙莉娜;凡星;張海琴;康厚揚;王益;崔忠剛
• 申請（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246
• 代理人: 龔燮英

1.一種快速有效鑒定偃麥草屬E^e基因組的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、待測偃麥草屬植物基因組DNA提取：

（1）取待測偃麥草屬植物幼嫩葉片3-5g，于液氮中研磨至粉末狀，放入50mL離心管中；

（2）加入15mL預(yù)熱至65℃的2×CTAB緩沖液，輕搖混勻，65℃水浴保溫30min，其間輕輕搖勻幾次；

（3）加入等體積的氯仿和異戊醇混合溶劑，氯仿與異戊醇的體積比為24：1，搖勻至上清液呈乳白色，4℃、10,000g離心10min，取上清；

（4）重復(fù)以上步驟，至分界面澄清；

（5）加入等體積預(yù)冷異丙醇，搖勻，放入-20℃冰箱沉淀30min；

（6）勾出DNA沉淀，用70%酒精洗2-3次，無水乙醇洗1-2次；

（7）風(fēng)干后，將DNA溶于TE溶液，置于-20℃冰箱中備用。

S2、設(shè)計PCR擴增特異引物及PCR擴增：

（1）偃麥草屬E^e基因組PCR擴增特異引物的序列：

PER1:CTACCTCCGTCCAGAAATAACT，

PEF1:CTCCCTCCCTCCAGAAATAACT；

（2）使用上述特異引物進行PCR擴增：

PCR反應(yīng)體系50μL，含10×ExTaq?buffer，MgCl₂2mmol/L,dNTP200μmol/L，引物0.4μmol/L，ExTaq酶1.5U，100ng待測偃麥草屬植物的DNA為模板，加重蒸水至終體積為50μL；

（3）PCR擴增程序：

94℃預(yù)變性4min；94℃變性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸1min，共35個循環(huán)；72℃保溫10min；

S3、將PCR擴增產(chǎn)物進行凝膠電泳檢測及鑒定，如果經(jīng)電泳檢測得到110bp的PCR擴增產(chǎn)物條帶，則所述待測偃麥草屬植物具有E^e基因組。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速有效鑒定偃麥草屬E^e基因組的方法，其特征在于：步驟S3中所述電泳檢測是通過質(zhì)量濃度為1.0%的瓊脂糖凝膠電泳進行檢測的。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速有效鑒定偃麥草屬E^e基因組的方法，其特征在于：是以待測偃麥草屬植物的基因組DNA為模板，用步驟S2中所述PCR擴增特異引物進行PCR擴增，如果經(jīng)電泳檢測得到110bp的PCR擴增產(chǎn)物條帶，則所述待測偃麥草屬植物具有E^e基因組。