[發明專利]防治土傳病害的微生物土壤改良劑

在審

• 申請號: 201310638417.6
• 申請日: 2013-11-29
• 公開（公告）號: CN104673696A
• 公開（公告）日: 2015-06-03
• 發明（設計）人: 崔國臣;顧艷麗;崔昌娜;周悅
• 申請（專利權）人: 大連三科生物工程有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/14;A01N63/04;A01P3/00;A01P1/00;C09K17/00;C12R1/07;C12R1/125;C12R1/01;C12R1/72;C12R1/465;C09K101/00
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司 21212
• 代理人: 賈漢生

1.防治土傳病害的微生物土壤改良劑，其特征在于：采用膠凍樣芽孢桿菌(Bacillus?mucilaginosus)CICC?No.21699、枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)ATCC?No.6633、沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudom?onas?Palustris)ATCCNo.33872、產朊假絲酵母(Candida?utilis)ATCC?No.22023和黃直絲鏈霉菌(Streptomyces?flavoretus)ACCC?No.40046制備菌種；所述菌種的質量百分比如下：膠凍樣芽孢桿菌5～25%，枯草芽孢桿菌15～50%，沼澤紅假單胞菌5～30%，產朊假絲酵母10～40%，黃直絲鏈霉菌10～35%。

2.根據權利要求1所述的防治土傳病害的微生物土壤改良劑的制備方法，其特征在于：

1）接種：配制各菌種的固體培養基，滅菌后嚴格進行無菌操作，從斜面轉接至平板，溫度28℃下培養3天；

2）一級培養：將長好的平板挑取單菌落轉接至裝有液體培養基的50mL錐形瓶中，無菌操作，30℃、130r/min培養24～48h；

3）二級發酵：將一級培養菌種接種于盛有液體培養基的500mL錐形瓶中，無菌操作，30℃、130r/min培養36～72h；

4）將各菌種按所述菌種的質量百分比混合，將混合后的菌液接種于盛有發酵培養基的發酵罐中，發酵培養基：葡萄糖50～100g/L、蔗糖20～100g/L、乳酪蛋白胨1～5g/L、蛋白胨1～5g/L、瓊脂1～5g/L、KH₂PO₄1～5g/L、尿素1～5g/L、K₂HPO₄5～20g/L、MgSO₄·7H₂O5～20g/L、NaCl5～20g/L、(NH₄)₂SO₄5～20g/L，其余為蒸餾水；pH6.0～8.0，接種量為1～5%，30℃下培養4～7天，使發酵液中菌數達到10～15×10⁸個/mL，即得到所述防治土傳病害的微生物土壤改良劑。

3.根據權利要求2所述的防治土傳病害的微生物土壤改良劑的制備方法，其特征在于：所述膠凍樣芽孢桿菌采用的液體培養基為：蔗糖10.0g，CaSO₄·2H₂O0.1g，K₂HPO₄0.2g，CaCO₃5.0g，MgSO₄·7H₂O0.2g，NaCl0.2g，蒸餾水定容至1.0L。

4.根據權利要求2所述的防治土傳病害的微生物土壤改良劑的制備方法，其特征在于：所述枯草芽孢桿菌采用的液體培養基為：牛肉膏5g、蛋白胨10g、Nacl3g、pH7.0，蒸餾水定容至1.0L。

5.根據權利要求2所述的防治土傳病害的微生物土壤改良劑的制備方法，其特征在于：所述沼澤紅假單胞菌采用的液體培養基為：NH4Cl1.5g，KH₂PO₄1.5g，MgSO₄·7H₂O0.8g，NaCl4.0g，NaHCO₃1.8g，CaCl₂0.01g，VB0.1g，酵母粉1.0g，CH₃COONa4.0g，微量元素1.0mL/L包括（FeCl₃·6H₂O5.0g，ZnSO₄·7H₂O1.0g，CuSO₄·5H₂O0.05g，CoCl₃·6H₂O0.5g，硼酸1.0g，MnCl₃·4H₂O0.5g），添加CH₃COOCH₃調節pH，蒸餾水定容至1.0L。

6.根據權利要求2所述的防治土傳病害的微生物土壤改良劑的制備方法，其特征在于：所述產朊假絲酵母采用的液體培養基為：稀釋去除啤酒花的麥芽汁至濃度為12Brix，瓊脂15g，高壓滅菌30分鐘。

7.根據權利要求2所述的防治土傳病害的微生物土壤改良劑的制備方法，其特征在于：所述黃直絲鏈霉菌采用的液體培養基為：蔗糖10.0g，CaSO₄·2H₂O0.1g，K₂HPO₄0.2g，CaCO₃5.0g，MgSO₄·7H₂O0.2g，NaCl0.2g，蒸餾水定容至1.0L。