[發(fā)明專利]純化水溶性納米銀顆粒鼠源性IgG類單抗偶聯(lián)物方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310638004.8
• 申請日: 2013-12-03
• 公開（公告）號: CN103665161A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 許恒毅;熊勇華;羅薇;魏華;賴衛(wèi)華;黃小林
• 申請（專利權(quán)）人: 南昌大學(xué)
• 主分類號: C07K16/14
• 分類號: C07K16/14;C07K16/44;C07K16/12;C07K1/13
• 代理公司: 南昌新天下專利商標(biāo)代理有限公司 36115
• 代理人: 施秀瑾

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及納米材料生物學(xué)修飾以及偶聯(lián)物純化的新方法，具體是涉及一種高效純化羧基化水溶性納米銀顆粒鼠源性IgG類單克隆抗體偶聯(lián)物的新方法。

背景技術(shù)

自從1975年應(yīng)用細(xì)胞融合技術(shù)首次制備出單克隆抗體以來，雜交瘤技術(shù)得到了迅速發(fā)展。大量的單克隆抗體被成功制備，并被廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)、生物化學(xué)、藥理學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、微生物學(xué)及臨床等各個領(lǐng)域。目前已制備了小鼠、大鼠及人的雜交瘤細(xì)胞株，其中應(yīng)用最廣泛的仍然是小鼠雜交瘤細(xì)胞株。因此，鼠源性鼠源性IgG類單克隆抗體自然而然地成為了一類最主要且應(yīng)用最為廣泛的單克隆抗體。該類抗體不僅具有重要的科研價值，而且具有巨大的商業(yè)價值。然而，鼠源性鼠源性IgG類單克隆抗體不具有類似納米材料的光、電等性質(zhì)，因此在實際應(yīng)用中往往需要結(jié)合其他的一些材料，如熒光物質(zhì)、有機染料，磁性材料等。

以金、銀納米顆粒為代表的貴金屬納米顆粒，具有特殊的光、電、磁等性質(zhì)，已經(jīng)發(fā)展為一種非常有效的生物探針。目前，金納米顆粒以其良好的生物相容性和光學(xué)穩(wěn)定性，非常高的消光系數(shù)，散射光強等優(yōu)勢代替了傳統(tǒng)的熒光標(biāo)記物，在細(xì)胞成像、DNA?雜交、蛋白質(zhì)相互作用等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用價值。銀納米顆粒（Sliver?nanoparticle，SNP）是一種金屬膠體，它和金納米顆粒一樣具有相當(dāng)強的消光系數(shù)，散射信號強，但是與之相比，同等粒徑的兩種納米顆粒，銀納米顆粒的消光系數(shù)更高，一般是其?100?倍左右。以20?nm?的金、銀納米顆粒為例，金納米顆粒的消光系數(shù)為8.78×10^8?M^-1·cm^-1，而銀納米顆粒達(dá)到了2.87×10^10?M^-1·cm^-1。如此強的散射信號為檢測提供了良好的信噪比，有效的降低了檢測限、提高了單分子檢測的靈敏度，為?DNA/RNA、活體病毒樣本的醫(yī)療檢驗等微量以及痕量的檢測提供了良好的標(biāo)記探針。

金屬納米顆粒及其表面表現(xiàn)出多樣且復(fù)雜的光學(xué)特性。包括貴金屬納米顆粒的強色彩，薄金屬層的表面等離子共振吸收，以及對金屬表面附近受激發(fā)染料的淬滅等。最近發(fā)現(xiàn)，熒光標(biāo)記物與金屬納米顆粒或者貴金屬表面的相互作用被用于獲得熒光信號的增強、基于金納米膠體淬滅的分析以及薄金屬層附近熒光標(biāo)記物的定向輻射等實驗現(xiàn)象。銀納米顆粒在金屬-增強熒光方面也表現(xiàn)出很大的優(yōu)勢。除了增強亮度外，金屬-熒光標(biāo)記物體系還表現(xiàn)出熒光壽命的縮短和穩(wěn)定性的增加以及光漂白的減少等優(yōu)點。金屬納米材料與熒光標(biāo)記物間的距離直接決定了熒光增強的效率，一般認(rèn)為，10?nm?是一個熒光增強效率的距離最優(yōu)值。但是，在一些大分子蛋白如綠色熒光蛋白以及免疫體系中，銀納米顆粒也存在著金屬-增強熒光的特性。