[發(fā)明專利]純化水溶性納米氧化鐵鼠源性IgG類單抗偶聯(lián)物的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310637575.X
• 申請日: 2013-12-03
• 公開（公告）號: CN103665160A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 熊勇華;許恒毅;羅薇;魏華;賴衛(wèi)華;黃小林
• 申請（專利權(quán)）人: 南昌大學(xué)
• 主分類號: C07K16/14
• 分類號: C07K16/14;C07K16/44;C07K16/12;C07K1/13
• 代理公司: 南昌新天下專利商標(biāo)代理有限公司 36115
• 代理人: 施秀瑾

1.一種純化水溶性納米氧化鐵鼠源性IgG類單抗偶聯(lián)物的方法，其特征在于包括以下步驟：（1）將水溶性羧基修飾的氧化鐵納米粒子活化，加入IgG類單克隆抗體溶液，調(diào)整溶液pH至7.0～9.0后，偶聯(lián)反應(yīng)；（2）偶聯(lián)反應(yīng)結(jié)束后，溶液中加入單端氨基化聚乙二醇（HO-PEG-NH₃）封閉偶聯(lián)產(chǎn)物中氧化鐵納米粒子表面殘留的羧基，將反應(yīng)溶液pH值調(diào)整至弱酸性；（3）用磁場強(qiáng)度為100?T/m?SuperMag^TM分離器或高速離心，棄上清液，取沉淀。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟（3）后，還有將沉淀用含25%甘油，0.01%?NaN₃的0.05?mol/L?pH?7.0～7.5磷酸鹽緩沖液溶解步驟。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于水溶性羧基修飾的氧化鐵納米粒子為核殼結(jié)構(gòu)的氧化鐵納米粒子，殼層由雙親聚合物組成，外部為大量親水羧基表面，內(nèi)層為長鏈?zhǔn)杷鶊F(tuán)通過與三辛基氧化磷的疏水作用將油溶性氧化鐵納米粒子包裹在殼層內(nèi)部。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟（1）中活化為將水溶性羧基修飾的氧化鐵納米粒子溶解于pH?5.0～6.0，0.05?mol/L硼酸鹽緩沖液中，分別加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺以及N-羥基硫代琥珀酰亞胺，37℃反應(yīng)2小時(shí)，活化水溶性氧化鐵納米粒子羧基。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺以及N-羥基硫代琥珀酰亞胺與氧化鐵納米粒子的摩爾比均為100～200：1，優(yōu)選為150:1；所述IgG類單克隆抗體與氧化鐵納米粒子的摩爾比為1～10：1。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于偶聯(lián)反應(yīng)結(jié)束后，在溶液中加入單端氨基化聚乙二醇（HO-PEG-NH₃）至單端氨基化聚乙二醇終濃度為1%～2%，充分混勻15～30分鐘。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟（2）中將反應(yīng)溶液pH值調(diào)整至弱酸性為將pH值調(diào)整至4.5～5.0，優(yōu)選為5.0。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在在于步驟（3）所述的高速離心離心力為28，000～30，000?g。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述IgG類單克隆抗體為抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體、抗赭曲霉毒素單克隆抗體、抗玉米赤霉烯酮單克隆抗體、抗恩諾沙星單克隆抗體、抗鹽酸克倫特羅單克隆抗體、抗沙丁胺醇單克隆抗體、抗孔雀石綠單克隆抗體、抗萊克多巴胺單克隆抗體、抗沙門氏菌單克隆抗體、抗志賀氏菌單克隆抗體、或抗空腸彎曲菌單克隆抗體。