[發(fā)明專利]樹脂串聯(lián)層析柱分離煙草多種類糖苷的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310636152.6
• 申請日: 2013-12-03
• 公開（公告）號: CN103833798A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 耿召良;葛永輝;鄧加德;張婕;向章敏;周淑平
• 申請（專利權(quán)）人: 貴州省煙草科學研究院
• 主分類號: C07H1/08
• 分類號: C07H1/08
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務(wù)所 52100
• 代理人: 趙彥棟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種樹脂串聯(lián)層析柱分離煙草多種類糖苷的方法。

背景技術(shù)

煙草香味是煙草品質(zhì)的重要體現(xiàn)。因此對于煙草香味成分的分離、鑒定和分析一直以來都是煙草研究的重要領(lǐng)域，其中潛香物質(zhì)結(jié)合態(tài)糖苷就是煙草香氣組成的重要部分。糖苷是單糖或低聚糖的半縮醛羥基和另一分子中的羥基、氨基、硫羥基等失水而產(chǎn)生的化合物，當配基為香氣成分時形成的物質(zhì)即為糖苷。糖苷類化合物是在煙葉生長發(fā)育過程中形成的，在自然狀態(tài)下雖不具揮發(fā)性或揮發(fā)性很低，但通過分解、調(diào)制、陳化、醇化、加工或燃燒能釋放出致香成分，因此糖苷類物質(zhì)的組成和含量對煙葉和煙氣香氣質(zhì)量有重要影響。

目前分離煙草中糖苷的方法主要分為三大類：第一類方法是提取的煙葉浸膏經(jīng)水溶解后直接過樹脂，然后再用水層進行有機溶劑萃取，該方法選擇先過樹脂再萃取，則水層因雜質(zhì)太多不利于樹脂對糖苷的充分吸附；第二類方法是提取的煙葉浸膏經(jīng)水溶解后，先用有機溶劑萃取，再過不同種類的樹脂，該方法提取物經(jīng)有機溶劑萃取后水層直接上樣進樹脂，不利于除有機溶劑環(huán)節(jié)，不利于糖苷的充分吸附。

目前在分離煙葉糖苷類物質(zhì)的方法中，均存在不利于去除有機溶劑、不利于糖苷類物質(zhì)充分吸附等缺點，且尚無對樹脂柱與層析柱之間以及層析柱之間的先后順序做出過詳細分析論證，也沒有報道過糖苷富集過程中層析柱的成本核算和分離效率分析。針對這些缺點，分離富集煙葉中的糖苷類物質(zhì)并建立相關(guān)的檢測方法，對于分析煙葉中重要糖苷類物質(zhì)含量、制備煙葉重要潛香物質(zhì)具有十分重要的現(xiàn)實意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：提供一種成本低廉、高效快速分離煙草多種類糖苷的方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)中樹脂對糖苷的充分吸附不充分、分離成本高的問題。

本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種樹脂串聯(lián)層析柱分離煙草多種類糖苷的方法，其特征在于：包含以下步驟：

???（1）裝柱：三菱HP20樹脂裝柱后甲醇浸泡，水洗至無味；??（2）減壓過濾：將烤煙超臨界總提物與水充分攪拌混合，減壓過濾；

（3）萃取：用水層與萃取液按體積比1:2的比例進行萃取，然后把萃取后的水層進行減壓旋蒸；?????????

（4）過樹脂：用水層上樣到三菱HP20樹脂，待其充分吸附后以PH=4.5鹽酸酸水洗脫至無生物堿、無色，用甲醇洗脫，將其濃縮去除甲醇后用水溶解即得糖苷初提物；

（5）過層析柱：把糖苷初提物采用干法或濕法上樣先選擇過正相硅膠柱，用氯仿與甲醇的混合物沖洗正相硅膠柱，然后根據(jù)不同分離段薄層展析硅膠板上斑點的位置及形狀情況確定合并分離段以及選擇過反相硅膠或凝膠柱。?

步驟（2）中烤煙超臨界總提物與水的混合比例為體積比1:10。所述萃取液為正己烷:乙醚體積比1:1混合而成。

本發(fā)明的有益效果：

一、水層中混有的有機溶劑與水及溶于水中的糖苷不溶而相互排斥，不利于樹脂對水層中糖苷等物質(zhì)的吸附截留，在過三菱HP20樹脂之前將其減壓旋蒸除去夾雜在水層中的有機溶劑，削弱因相互不溶的排斥力，使得糖苷完全溶于水后更易進入三菱HP20樹脂的空腔內(nèi)，達到最大限度的保留了糖苷種類的齊全。

二、在層析柱的順序上選擇先過正相硅膠柱，然后再過反相硅膠或凝膠柱。這樣可以將更多的雜質(zhì)充分的吸附在便宜的正相硅膠柱上，從而實現(xiàn)保護昂貴反相硅膠或凝膠柱的目的。這樣節(jié)約了成本。糖苷在煙草中的含量極低，加上糖苷屬于極性分子，所以在同等柱床體積下，優(yōu)先選擇正相硅膠柱因其便宜且能吸附分離含量極低的極性分子糖苷，可以實現(xiàn)一次上樣量最大化。

附圖說明

圖1為總提物核磁共振圖譜；

圖2為三菱HP20樹脂分離后糖苷類物質(zhì)核磁共振圖譜；

圖3為三菱HP20樹脂分離后薄層展析圖，其中1、暗箱三用紫外線分析儀；2、碘缸顯色；3、ａ萘酚糖苷顯色劑；4、生物堿顯色劑；

圖4為層析柱分離后糖苷類物質(zhì)核磁共振圖譜；

圖5為本發(fā)明的工藝流程圖。

具體實施方式

1、裝柱：三菱HP20樹脂裝柱后甲醇浸泡48小時，水洗至無味。

2、減壓過濾：將烤煙超臨界總提物與水按1:10的比例充分攪拌混合，減壓過濾。

從圖1看出，總提物中化學成分較為復(fù)雜，從核磁圖譜中，能看出含有生物堿類，糖苷類，萜類，脂肪酸類物質(zhì)的¹H吸收特征峰。