[發(fā)明專利]一種用液相色譜法分離測定枸櫞酸托法替尼及其光學(xué)異構(gòu)體的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310635901.3
• 申請(qǐng)日: 2013-12-03
• 公開（公告）號(hào): CN104678001A
• 公開（公告）日: 2015-06-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 段玉娟;孫攀;胡芃;張道林;付曉泰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 重慶醫(yī)藥工業(yè)研究院有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/60
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種用液相色譜法分離測定枸櫞酸托法替尼及其光學(xué)異構(gòu)體的方法。

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背景技術(shù)

枸櫞酸托法替尼是一種治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥物，主要機(jī)理是JAK-1和-3酪氨酸激酶抑制劑，其化學(xué)名為3-((3R,4R)-4-甲基-3-(甲基(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)-3-氧代丙腈·枸櫞酸鹽（1:1），英文名為Tofacitinib?Citrate，分子式為C₁₆H₂₀N₆O·C₆H₈O₇，結(jié)構(gòu)式為：

枸櫞酸托法替尼分子中含有2個(gè)手性碳原子，有RR、RS、SR、SS四種光學(xué)異構(gòu)體，其中RR構(gòu)型是有效的JAK-1和-3酪氨酸激酶抑制劑，而其他構(gòu)型并無生物等效性，因此，在藥物合成過程中需要對(duì)光學(xué)異構(gòu)體進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制。含多個(gè)手性碳原子的對(duì)映異構(gòu)體的分離一直是手性藥物合成和制劑過程中質(zhì)量控制的難點(diǎn)，因此，實(shí)現(xiàn)枸櫞酸托法替尼及其光學(xué)異構(gòu)體的分離在枸櫞酸托法替尼的合成和制劑過程的質(zhì)量控制方面具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

現(xiàn)有技術(shù)（Jian-kang?Jiang?et?al.?Examining?the?Chirality,?Conformation?and?Selective?Kinase?Inhibition?of?3-((3R,4R)-4-methyl-3-(methyl(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)amino)?piperidin?-1-yl?)?-3-oxopropanenitrile?(CP-690,550).?J.?Med.?Chem.?2008,?51,?8012–8018）公開了一種以Daicel?Chiralpak?OD手性色譜柱為分離柱，以100%甲醇為流動(dòng)相，分離測定托枸櫞酸托法替尼及其光學(xué)異構(gòu)體的方法。經(jīng)驗(yàn)證，該方法可以將枸櫞酸托法替尼RR構(gòu)型與其他構(gòu)型分離，出峰順序分別為SR構(gòu)型，RR構(gòu)型，SS構(gòu)型以及RS構(gòu)型，但是有兩個(gè)缺點(diǎn)：一是此分析方法在分離四個(gè)光學(xué)異構(gòu)體時(shí)，四個(gè)組分并能不相互之間達(dá)到基線分離，SS構(gòu)型和RS構(gòu)型有部分重合，不能完全分離；二是采用此分析方法檢測在枸櫞酸托法替尼RR構(gòu)型中加入其他構(gòu)型時(shí)，并未達(dá)到理想的檢測限（≤0.10%），從而導(dǎo)致檢測限較低，無法準(zhǔn)確測定成品中光學(xué)異構(gòu)體的含量，不能有效地控制枸櫞酸托法替尼的質(zhì)量。

經(jīng)過大量的反復(fù)試驗(yàn)，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，用三（3，5-二氯苯基）-氨基甲酸酯纖維素或者三（3，5-二甲基苯基）-氨基甲酸酯纖維素為填料的手性色譜柱，以正己烷-低級(jí)醇-胺溶液為流動(dòng)相，即可以將枸櫞酸托法替尼及其光學(xué)異構(gòu)體進(jìn)行有效分離，該方法下基線平穩(wěn)，主峰峰形較好，檢測限較高，從而可以準(zhǔn)確控制枸櫞酸托法替尼的質(zhì)量。

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發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種用高效液相色譜分離測定枸櫞酸托法替尼及其光學(xué)異構(gòu)體的方法，從而實(shí)現(xiàn)枸櫞酸托法替尼及其光學(xué)異構(gòu)體的分離與測定。

本發(fā)明所述的用高效液相色譜分離測定枸櫞酸托法替尼及其光學(xué)異構(gòu)體的方法，是以三（3，5-二氯苯基）-氨基甲酸酯纖維素或者三（3，5-二甲基苯基）-氨基甲酸酯纖維素為填料的手性色譜柱，以正己烷-低級(jí)醇-胺溶液為流動(dòng)相。所述高效液相色譜方法包括高效液相色譜法或高效液相色譜法-質(zhì)譜法聯(lián)用。

上述本發(fā)明的方法，所述手性色譜柱為選自牌號(hào)為Daicel??CHIRALPAK?IC和Sepax?MS?Chiral?MS-5的色譜柱。

上述本發(fā)明的方法，所述低級(jí)醇選自甲醇、無水乙醇、丙醇和異丙醇，優(yōu)選為無水乙醇或異丙醇；所述胺為二乙胺或三乙胺，其中，流動(dòng)相中正己烷-低級(jí)醇的體積比為55:45~85:15，胺濃度為正己烷（V/V）的0.05%~0.5%。

在一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的一種用高效液相色譜法分離測定枸櫞酸托法替尼及其光學(xué)異構(gòu)體的方法，包括：采用三（3，5-二氯苯基）-氨基甲酸酯纖維素或者三（3，5-二甲基苯基）-氨基甲酸酯纖維素為填料的手性色譜柱，以正己烷-低級(jí)醇-胺溶液為流動(dòng)相，所述胺為二乙胺或者三乙胺，其濃度為正己烷的0.05%~0.5%V/V，正己烷-低級(jí)醇的體積比為55:45~85:15。

在上述具體實(shí)施方案中，所述手性色譜柱選自Daicel?CHIRALPAK?IC和Sepax?MS?Chiral?MS-5牌號(hào)的色譜柱。