[發明專利]一種基于TRAIL受體信號通路的抗腫瘤藥物篩選系統

有效

• 申請號: 201310634548.7
• 申請日: 2013-12-02
• 公開（公告）號: CN103627779A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: 蘇玲;劉相國;徐林艷;楊麗娜
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: C12Q1/66
• 分類號: C12Q1/66;C12Q1/02
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 李健康

1.一種基于TRAIL受體信號通路的抗腫瘤藥物篩選系統，其特征在于：所述系統由含DR5啟動子與熒光素酶報告基因的融合基因的細胞、細胞培養裂解試劑，熒光素酶檢測底物構成。

2.根據權利要求1所述的基于TRAIL受體信號通路的抗腫瘤藥物篩選系統，其特征在于：所述含DR5啟動子與熒光素酶報告基因的融合基因的細胞是含DR5啟動子與熒光素酶報告基因的融合基因的非小細胞肺癌細胞A549，命名為：A549-pDR5-luc；或是含DR5啟動子與熒光素酶報告基因的融合基因的非小細胞肺癌細胞H157，命名為：H157-pDR5-luc；所述細胞培養裂解試劑為promega公司的熒光素酶檢測系統中的細胞培養裂解試劑；所述熒光素酶檢測底物為promega公司的熒光素酶檢測系統中的熒光素酶檢測底物。

3.權利要求2所述的基于TRAIL受體信號通路的抗腫瘤藥物篩選系統在篩選抗腫瘤藥物中的應用，步驟是：

1）選擇所構建的A549-pDR5-luc或H157-pDR5-luc細胞以6×10⁴個/孔細胞接種于含5%血清的RPIM1640培養基的24孔板中，在37℃，5%CO₂，飽和濕度的培養箱中培養24—48h；

2）選取待篩選的化合物，根據其特性先溶解為1mM—10mM濃度的溶液，然后將溶解好的化合物按終濃度是0—40μM的梯度濃度加入到步驟1）培養的細胞中，同時每種濃度設置3個平行孔，然后處理6—12h；

3）待處理結束時，棄掉各孔中的細胞培養基，再用PBS清洗一次細胞，然后每孔中加入200—250μL細胞裂解液，使裂解緩沖液完全覆蓋細胞，并在4℃靜置，裂解處理30—40min；

4）充分吹打裂解后的細胞，將所有的細胞碎片和液體轉移至離心管中，在4℃的離心機中，13000±500rpm下離心2—5min；

5）取15μL離心后樣品的上清液與10μL熒光素酶檢測底物共放入熒光光度計試管中混勻并使其反應；

6）將反應后的試管放入熒光光度計中進行檢測，記錄數據并求取平均值，根據檢測的數值判斷該待篩選的化合物是否有抗腫瘤活性；當待篩選的化合物藥物處理組的檢測數值減去對照組的檢測數值大于5000時，說明該待篩選的化合物能明顯誘導DR5啟動子的活化，預示該化合物為潛在的抗腫瘤化合物。

4.如權利要求3所述的應用，其特征在于：所述待篩選的化合物是合成化合物、天然產物、有機小分子、無機小分子、脂類、糖類中的一種或幾種。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于：所述待篩選的化合物是從天然植物中提取的化合物2’-羥基，4’,5’-二甲氧基査尓酮（DHMC）或豆蔻明（Cardamonin）。

6.如權利要求3所述的應用，其特征在于：所述對照組的檢測數值對于A549-pDR5-luc細胞，空白對照組數值一般為4000±500；對于H157-pDR5-luc細胞，空白對照組數值一般為8000±500。