[發明專利]一種以川貝母根為外植體的川貝母愈傷組織的培養方法

有效

• 申請號: 201310632796.8
• 申請日: 2013-11-27
• 公開（公告）號: CN103621406A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: 王躍華;劉濤;范文萍;楊敏;江明殊;郭翠平;何詩虹;王曉蓉;李睿玉;許志強;王磊
• 申請（專利權）人: 成都大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 成都科奧專利事務所(普通合伙) 51101
• 代理人: 王蔚

1.一種以川貝母根為外植體的川貝母愈傷組織的培養方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)外植體的選擇和消毒處理：切取生長二年以上的川貝母植株上的根，先用濃度為0.02%～0.05%的升汞溶液沖洗干凈，然后置于15～20℃的條件下陰干3～6小時，再在超凈臺上，用配制的升汞溶液消毒處理3～6min，所述配制的升汞溶液是按每100ml濃度為0.1%升汞溶液中滴加0.5～1.0ml濃度為0.3～0.5%的聚乙二醇辛基苯基醚溶液配制的；

(2)愈傷組織的誘導培養：切取步驟（1）中已消毒的川貝母根尖0.5～2cm的長度，接入改良的MS+2iP0.5～1.5mg·L^-1+NAA0.3～1.0mg·L^-1+頭孢曲松鈉200～500mg·L^-1+香蕉汁100～300mg·L^-1的愈傷組織誘導培養基中，在溫度為10～18℃、每天光照4～10小時和光照強度為1500～2000lx的條件下進行培養，所述改良的MS基本培養基為硝酸氨含量減半的MS基本培養基；

(3)愈傷組織的增殖培養：選取步驟（2）中培養的質地較緊密和顏色為白色的愈傷組織，切成0.3～1.0cm³的大小后轉接入B5+2,4-D1.0～4.0mg·L^-1+KT0.1～1.0mg·L^-1+多效唑0.5～2.0mg·L^-1+活性炭1.0～2.0mg·L^-1的增殖培養基中，在溫度為15～22℃、每天光照2～5小時和光照強度為300～600lx的條件下進行愈傷組織的增殖培養；

上述所有培養基的pH值為5.6～6.5、蔗糖35～45g·L^-1、瓊脂5.0～6.0g·L^-1。

2.根據權利要求1所述的一種以川貝母根為外植體的川貝母愈傷組織的培養方法，其特征在于：步驟（1）中所選擇的根的直徑為2～4mm。

3.根據權利要求1所述的一種以川貝母根為外植體的川貝母愈傷組織的培養方法，其特征在于：步驟（2）中所述川貝母根尖以平放方式接入愈傷組織誘導培養基中。