[發明專利]miR-30家族抑制劑在制備防治急性心肌梗死藥物中的用途

在審

• 申請號: 201310631981.5
• 申請日: 2013-11-30
• 公開（公告）號: CN104667295A
• 公開（公告）日: 2015-06-03
• 發明（設計）人: 朱依諄;沈亞琪
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61P9/10
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

技術領域

本發明屬制藥領域，涉及小核酸藥物，具體涉及小核酸藥物miR-30家族抑制劑在制備防治急性心肌梗死藥物中的用途。

背景技術

現有技術公開了心肌梗死是指冠狀動脈的血流急劇減少或中斷，使相應的心肌出現嚴重而持久地急性缺血，最終導致一系列病例變化。目前臨床實踐中對缺血性心臟病的最佳治療方法是血運重建加藥物治療，但實踐顯示，經皮冠狀動脈介入(PCI)有支架內再狹窄的風險，冠脈旁路移植術有移植物閉塞的可能。因此深入探索缺血性心臟病發生機制，發現新的作用靶點，尋找有效的防治措施是本領域目前研究的一個熱點。

研究顯示，微小RNA(miRNA)在心肌缺血的發生發展中起著重要作用。miRNA是一種微小的，內源性，保守的非編碼RNA，它約含有大約22個核苷酸，可與靶基因mRNA的3′-非翻譯區相互配對結合，通過降解mRNA或抑制翻譯，在轉錄后水平負調控靶基因的表達。研究顯示miRNA參與了心臟疾病的不同病理生理過程，包括心律失常，心衰，心肌梗死，心肌肥大，心肌纖維化等。

H₂S被認為是心血管功能調節的新型氣體信號分子，對多種心臟疾病起到保護作用，包括抑制心肌缺血損傷、保護心肌病引起的心臟損傷、治療冠心病、抗心臟氧化應激及負性調節心臟收縮等。內源性H₂S在機體內主要有三種酶催化生成，包括胱硫醚-β-合成酶(CBS)、胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和巰基丙酮酸轉硫酶(3-MST)。CBS主要分布于神經系統，CSE主要存在于心血管組織中。

雖然miRNAs和H₂S都參與心肌缺血的保護作用，但miRNAs與H₂S之間的關系目前尚不清楚。尤其是miRNA通過調節H₂S在急性心肌梗死中的作用未見有報道。

發明內容

本發明的目的是提供小核酸藥物miR-30家族抑制劑在制備防治急性心肌梗死損傷的藥物中的新的用途。

本發明進行了體外缺血缺氧細胞模型和體內心肌梗死模型實驗研究，結果顯示所述的miR-30家族抑制劑通過增加胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）的表達，增加H₂S的生成，從而保護缺血缺氧引起的體外細胞損傷，保護冠狀動脈結扎所導致的的小鼠急性心肌梗死性損傷，結果證實miR-30家族抑制劑對缺血缺氧引起的心肌損傷具有明顯的保護作用，

本發明所述的miR-30家族抑制劑是經過鎖核酸（LNA）修飾的寡核苷酸（可市購），其堿基序列為：GGATGTTTAC，它可以和miR-30家族成員（包括miR-30a，miR-30b，miR-30c，miR-30d，miR-30e）5’端第2-11個堿基完全互補配對。

本發明中，通過real-timePCR和western?blot方法檢測轉染miR-30家族抑制劑后對CSE表達的影響及對H₂S生成的影響，同時檢測miR-30家族抑制劑對缺血缺氧引起的原代心肌細胞損傷的保護作用，結果表明，miR-30家族抑制劑可以劑量依賴性地增加CSE的表達和H₂S的生成，通過增加細胞活力，減少細胞凋亡，從而保護心肌細胞的缺血缺氧損傷。

本發明的實驗中，首先建立小鼠心肌梗死模型，通過檢測心梗面積，心梗標志物，心功能和心肌細胞的凋亡情況觀察尾靜脈注射miR-30家族抑制劑后對心肌梗死的保護作用，結果表明，尾靜脈注射miR-30家族抑制劑可以劑量依賴性地增加小鼠心臟中CSE的表達和血漿中H₂S的含量，從而通過減少心梗面積，改善心功能（增加射血分數EF和縮短分數FS），減少心臟梗死邊緣區的細胞凋亡數量，保護急性心肌梗死損傷；更具體的，所述的miR-30家族抑制劑通過調控胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）mRNA和蛋白的表達發揮保護急性心肌梗死損傷的作用；所述的miR-30家族抑制劑通過調控硫化氫（H₂S）的產生發揮保護急性心肌梗死損傷的作用；所述的miR-30家族抑制劑通過增加細胞存活率和減少細胞凋亡發揮保護急性心肌梗死損傷的作用；所述的miR-30家族抑制劑通過減少梗死面積，減少梗死邊緣區心肌細胞的凋亡和改善心臟功能發揮保護急性心肌梗死損傷的作用。